背景[1-3]
绵羊血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ELISA法在体外检测绵羊血管紧张素转化酶(ACE)。
用抗绵羊ACE抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的绵羊ACE与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗绵羊ACE抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗绵羊ACE抗体与结合在包被抗体上的绵羊ACE结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，绵羊ACE浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中绵羊ACE的浓度。
绵羊血管紧张素转化酶 (ACE)结构图
绵羊血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒操作步骤
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
应用[4][5]
用于胎儿心脑血管调控的中枢RAS和PKC机制的功能发育研究
从心脑血管调控机制的发育着手,探讨血管紧张素转化酶（ACE）在胎儿的功能发育状况,并探讨血管紧张素（Ang）Ⅱ诱发血管平滑肌收缩的重要信号转导途径—蛋白激酶C（PKC）机制在脑动脉上的发育。
方法:实验选用孕晚期绵羊胎儿行子宫内置管手术,术后行侧脑室注射,实时监测心血管功能、皮层电图等,并进行血浆激素测定和脑c-fos表达检测。离体脑血管实验选用绵羊胎儿和成年大脑中动脉（MCA）进行血管收缩和细胞内钙浓度（[Ca2+]i）检测。
结果:1.孕晚期绵羊胎儿脑特异性中枢位点可检测到ACE mRNA;
2. 胎儿侧脑室注射AngⅠ可诱发AngⅡ样的升压、吞咽、促加压素和催产素释放;ACE竞争性抑制剂captopril显著抑制此反应;
3. AngⅠ诱发心血管和体液调控中枢c-fos表达增加;
4. PKC激活可增高胎儿和成年MCA血管张力,对[Ca2+]i无显著影响;
5. 大电导Ca2+激活的K+通道（BK）阻断剂可增强胎儿PKC激活诱发的MCA收缩并升高[Ca2+]i;去除细胞外钙或使用L型Ca2+通道抑制剂可阻断此反应;成年无此现象;
6. 在两年龄组,细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂U-0126均能显著抑制PKC激活诱发的MCA收缩;
7. Rho激酶抑制剂Y-7632显著抑制胎儿MCA上PKC激活诱发的血管收缩,在成年无此作用。
结论:胎儿内源性中枢RAS关键酶ACE在孕后1/3阶段已有功能,可将AngⅠ转化为AngⅡ作用于中枢发挥生物学效应。脑血管平滑肌上有关AngⅡ的重要信号转导途径—PKC的功能发育学研究显示,在胎儿而非成年MCA,BK通道在PKC激活所导致的血管收缩反应中起重要作用。
MEK/ERK信号转导通路在两组PKC反应中均起重要作用,但RhoA/Rho激酶信号转导通路仅在胎儿MCA被涉及,说明成熟与未成熟脑动脉平滑肌上PKC诱发的血管收缩信号调节途径存在多处发育学差异。
参考文献
[1]Mice deficient in oxytocin manifest increased saline consumption following overnight fluid deprivation.Amico J.A,Morris M,Vollmer R.R.American Journal of Physiology.2001
[2]Protein Kinase C:Role in Sustained Cellular Responses.Rasmussen H,Calle R,Ganesan S,Smallwood J,Throckmorton D,Zawalich W.Ellis Horwood.1991
[3]ERKs,extracellular signal-regulated MAP2 kinases.Cobb,M.H.,Robbins,D.J.,Boulton,T.G.Curr.Opinion Cell Biol.1991
[4]Identification of PKC-isoform-specific biological actions using pharmacological approaches.Way KJ,Chou E,King GL.Trends in Pharmacological Sciences.2000
[5]石丽君.胎儿心脑血管调控的中枢RAS和PKC机制的功能发育[D].北京体育大学,2009.