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蜡样芽胞杆菌显色培养基的应用

发布日期:2021/4/30 15:35:56

背景[1-3]

蜡样芽胞杆菌显色培养基用于蜡样芽胞杆菌的显色培养,蜡样芽孢杆菌会在培养基上显蓝绿色且菌落周围有一不透明环,其它菌显蓝绿色、黄色或无色,革兰氏阴性菌被抑制。主要用于食品、水、乳制品和肉制品中蜡样芽孢杆菌的快速检测。

蜡样芽胞杆菌显色培养基

用法:

称取基础培养基7.95g,加入180ml蒸馏水,加热溶解并不停搅拌;另取0.6g蜡样芽孢杆菌添加剂,加入20ml无菌水,并加入一些玻璃球,不停振动5-10min,使其乳化均匀,将二者分别于121℃高压灭菌15min。冷至45-50℃左右时,把蜡样芽孢杆菌添加剂加入基础培养基中,轻轻混匀,倾入无菌平皿。使培养基的厚度约为1-2mm,这样有利观察不透明环。

蜡样芽孢杆菌显色培养基使用步骤:

1、取瓶内蜡样芽孢杆菌显色培养基40克,用1000ml蒸馏水或纯水溶解,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃15min高压灭菌,冷至50℃,每瓶添加剂(SR0210)中加入1ml无菌水,使之完全溶解,然后加入100毫升培养基中,混匀,倾注灭菌平皿。

2、用无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液配制10-1~10-5的样本稀释液按GB/T 4789.2测定

3、取各稀释液0.1ml接种至蜡样芽孢杆菌显色琼脂平板上涂布或划线。

4、37℃培养24小时,选取适当菌落数的平板进行计数。

5、通过验证试验进一步确认假定性蜡样芽孢杆菌,如氧化酶、革兰氏染色等。

应用[4][5]

用于乳制品中蜡样芽孢杆菌的暴露研究

以奶粉、巴杀乳、UHT乳和发酵乳四种主要乳制品作为研究对象,利用概率论统计的方法研究乳制品加工过程中蜡样芽孢杆菌杆菌的分布情况,对乳制品生产过程各个关键控制点中蜡样芽孢杆菌的污染情况进行研究统计,对于保障奶粉安全和指导奶粉生产具有重要意义。

结论如下:1、通过对32批次奶粉加工过程中各关键控制点样品定性检测,得出了浓缩后、喷雾干燥后、流化床后和成品中蜡样芽孢杆菌的污染率分别为0%、12.5%、6.25%和7.81%。

2、通过奶粉货架期中蜡样芽孢杆菌污染模拟试验,得出了37℃下贮存第0月、第1月和第2月蜡样芽孢杆菌含量分别为23.1cfu/100g.9.1cfu/100g和3.6cfu/100g,第3月样品中蜡样芽孢杆菌最可能数少于3cfu/100g,6个月后贮藏样品只有少部分检出且含量低于lcfu/100g。

3、通过对发酵乳加工过程关键控制点蜡样芽孢杆菌污染情况的调查,得出了投产前生乳、配料后、巴氏杀菌(88~94℃,300s)后、灌装后成品中蜡样芽孢杆菌的污染率分别为15.63%、18.75%、9.38%、3.13%。

4、通过发酵乳货架期中蜡样芽孢杆菌污染模拟试验,得出了4℃下贮存第0d蜡样芽孢杆菌含量为15cfu/100mL,第3d含量为5.6cfu/100mL、第5d含量为2.54cfu/100mL、第7d含量为0.8cfu/100mL、第14d和第21d样品中蜡样芽孢杆菌含量均小于0.3cfu/100mL。

5、通过对巴氏杀菌乳加工过程关键控制点蜡样芽孢杆菌污染情况的调查,得出了投产前生乳、配料后、巴氏杀菌(88-94℃,300s)后、灌5装后成品中蜡样芽孢杆菌的污染率分别为9.38%、12.5%、25%、21.88%。其中含量在在≤10个/克的样品有31件,占96.9%,在10100个/克之间的样品只有1个,占3.1%。

6、通过对UHT高温瞬时杀菌乳加工过程关键控制点蜡样芽孢杆菌污染情况的调查,得出了投产前生乳、配料后、巴氏杀菌(88~94℃,300s)后、灌装后成品中蜡样芽孢杆菌的污染率分别为21.88%、12.75%、12.5%、0%。

参考文献

[1]Virulent gene based DNA probe for the detection of pathogenic Bacillus cereus strains found in food[J].S.Bala Subramanian,A.S.Kamat,K.K.Ussuf,R.D.Tyagi.Process Biochemistry.2005(4)

[2]Purification and cytotoxic properties of Bacillus cereus hemolysin II[J].Zhanna I.Andreeva,Vladimir F.Nesterenko,Igor S.Yurkov,Zhanna I.Budarina,Elena V.Sineva,Alexander S.Solonin.Protein Expression and Purification.2005(1)

[3]The higher toxicity of cereulide relative to valinomycin is due to its higher affinity for potassium at physiological plasma concentration[J].Vera V.Teplova,Raimo Mikkola,Anton A.Tonshin,Nils-Erik L.Saris,Mirja S.Salkinoja-Salonen.Toxicology and Applied Pharmacology.2005(1)

[4]Phenotypic and genotypic comparisons reveal a broad distribution and heterogeneity of hemolysin BL genes among Bacillus cereus isolates[J].Suwicha Thaenthanee,Amy C.Lee Wong,Watanalai Panbangred.International Journal of Food Microbiology.2005(2)

[5]赵月明.乳制品中蜡样芽孢杆菌的暴露研究[D].中南林业科技大学,2014.

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