背景及概述[1-2]
香蒲新甙(Typhaneoside)是蒲黄中的主要黄酮成分之一。香蒲属植物长于池沼、水边或浅沼泽中，世界共有18个种，我国约有10个种，资源极其丰富。蒲黄，别名蒲棒花粉、蒲草黄系香蒲科(Typhaceae)植物水烛香蒲(TyphaangustifoliaL.)、东方香蒲(TyphaorientalisPresl.)或同属植物的干燥花粉，具有止血、化瘀、通淋的功能，用于吐血、崩漏、外伤出血，经闭痛经，血淋涩痛。蒲黄主要含有甾类、黄酮类、长链脂肪烃类化合物、酸性成分、氨基酸、无机成分等。其中黄酮类成分具有改善微循环、降低心脑组织耗氧量、扩张血管、促凝血、抗炎、引产、降低血脂及抗动脉粥样硬化等作用。
制备[1-2]
报道一、
取蒲黄药材25kg，加入浓度为70％的乙醇175L，浸泡30小时后，加热回流提取1小时，静置1小时，吸取上清液。药渣用同样的方法先后提取3次，提取药液合并，药渣弃去。将上清液与提取液合并，水浴加热，水浴温度70℃，减压浓缩至浓缩液至无醇味，得稠膏即蒲黄总提取物2.5kg。
取上述稠膏53g，拌入180g，120目粗硅胶，自然干燥，得到拌样硅胶。另取180目硅胶1600g，100～105℃活化1.5小时后，干法装柱，径高比为1∶5；将拌样硅胶加入柱中，以10∶1∶1乙酸乙酯-甲醇-水混合溶剂2000毫升为展开剂，下行法展开，进行干柱层析，待展开剂前沿到达色谱柱底部时，放干溶剂，色带切割，共得到10份。各份用甲醇1750ml洗脱。洗脱液减压回收溶剂后，得各洗脱物；其中第5份和第6份香蒲新甙含量较高，合并，得到香蒲新甙粗品8g。
香蒲新甙精品的制备采用减压柱层析方法。吸附剂为薄层层析用200目的硅胶H(青岛海洋化工厂生产，用量110g)。香蒲新苷粗品8g用100ml甲醇溶解后，加到4倍量的粗硅胶(160～200目)中，拌匀，挥干溶剂，干法上样(色谱柱直径12cm，高4cm)。洗脱剂依次采用不同比例的乙酸乙酯-无水乙醇混合溶剂，进行梯度洗脱(梯度为100∶0、95∶5、90∶10、85∶15、80∶20、75∶25、70∶30、65∶35、60∶40、55∶45、50∶50、45∶55、40∶60)，每个梯度洗脱剂用量为200mL，洗脱流速为每分钟4mL，洗脱剂总用量为2600mL，每份100mL，减压浓缩至小体积(约18mL)后，把其中第8～10份浓缩液合并，减压抽干得到香蒲新甙精品黄色粉末3.00g。
香蒲新甙的纯化：上述香蒲新甙精品黄色粉末3.00g以60mL甲醇溶解，上样(SephadexLH-20凝胶80g，乙醇浸泡30小时后，湿法装柱。色谱柱直径3cm，高60cm)，用甲醇150毫升进行洗脱，待色带到柱底部时，开始收集洗脱液，每份10mL，共收集10份。把其中第6～9份分别浓缩至小体积(2.8mL)后，加入25倍量乙酸乙酯，静置1.5小时，沉淀，过滤，沉淀用30毫升乙酸乙酯洗涤后，自然干燥，即得到香蒲新甙纯品2.8克，为淡黄色粉末。
报道二、
将蒲黄2kg装入超临界萃取装置的萃取釜中，以超临界CO2为溶剂，进行蒲黄的超临界萃取，萃取压力为28MPa，温度为45℃，萃取时间3小时，CO2流量为25L/h，待提取罐内环境稳定后，加入65％丙酮携带剂(药材量的20％)至携带剂储罐中，调节解析斧温度为55℃，压力为8MPa，收集从解析釜出料口放出的萃取物。用正丁醇萃取萃取物，减压浓缩得244g浸膏。取50g浸膏加硅胶(浸膏∶硅胶＝1∶3)搅拌均匀，低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，氯仿-乙醇混合溶液按体积比9∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2进行梯度洗脱，每个梯度洗脱剂用量为200ml，洗脱流速为4ml/min，收集各部分洗脱液，TLC跟踪监测，收集香蒲新甙流分，减压浓缩得到香蒲新甙粗品，取粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到香蒲新甙纯品264mg。
上述的制备高效液相色谱仪的条件如下：制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32(体积比)，流速为5ml/min，检测波长为254nm。
参考文献
[1][中国发明,中国发明授权]CN200410101783.9蒲黄中香蒲新苷的提取分离方法
[2][中国发明]CN201110117581.3一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺