背景[1-3]
线粒体染色试剂盒可以标记活细胞中的线粒体，使之带绿色荧光(Ex/Em=490/520 nm)。本试剂盒使用染料为一种疏水性复合物，属线粒体选择性染料，该染料能轻易进入活细胞内，通过线粒体膜电位变化渗透进入线粒体，并在线粒体中富集。
线粒体染色
线粒体染色试剂盒能提供蓝色/绿色/红色/橙色等不同荧光供选择，既可单独使用，也支持对细胞的多重荧光分析。这种高效的细胞标签为从空间上和时间上研究发生的细胞活动提供了一种十分有效的方法。
使用方法：
1.准备线粒体染色液
1.1室温避光放置5-10分钟，预热MitoView Green染料(Component A)。
1.2取20µL预热好的MitoView Green染料(Component A)，用10 mL活细胞染色缓冲液(Component B)进行稀释。
2.细胞染色
2.1贴壁细胞：在96孔板（100μL）或培养皿内培养细胞，当细胞达到70-80%融合度，在96孔板或培养皿内添加等体积的染色工作液(步骤1.2)，在37°C,5%CO2条件下培养细胞30分钟-2小时。用HHBS[含20mM Hepes的Hanks缓冲液]或用自配Buffer(Hanks Buffer与生长培养基按1:1)替换色染液。同FITC设置在显微镜下进行荧光观察。
2.2悬浮细胞:在1000 rpm条件下离心细胞培养液5分钟，弃去上清，用预热好的细胞培养液温和的重悬细胞，然后添加等体积的染色工作液(步骤1.2)，在37°C,5%CO2条件下培养细胞30分钟-2小时。用HHBS[含20mM Hepes的Hanks缓冲液]或用自配Buffer(Hanks Buffer与生长培养基按1:1)替换色染液。同FITC设置在显微镜下进行荧光观察。
应用[4][5]
用于基于线粒体途径探讨安寐汤抑制失眠大鼠皮质神经元兴奋机制研究
首先采用3月龄SPF级SD大鼠,雌雄不分,3-21月龄,按文献对氯苯丙氨酸（PCPA）腹腔注射的方法进行失眠模型制作,并分别于造模后第1、2、3和4天观察额叶皮质神经元线粒体形态功能的改变；采用超活染色和电镜分别观察线粒体的数目和超微结构变化,同时采用荧光显微镜检测线粒体膜电位改变和WST-1法测定线粒体ATP酶含量。
其次,基于上述变化时间点采用3、6、9、12月龄大鼠进行造模3天后分别观察线粒体的数目和超微结构变化,同时采用荧光显微镜检测线粒体膜电位改变和WST-1法测定线粒体ATP酶含量。
线粒体超活染色观察实验结束后用脊椎脱臼法处死大鼠,在枕骨大孔处迅速剪断延髓,去颅骨,完全暴露脑组织,取出脑组织,分离出额叶皮质后,在冰冷生理盐水中洗净后,在冰浴条件下充分匀浆,离心,取上清液待用。詹纳斯绿B（JGB）可特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色,从而判断线粒体功能的完整性。具体按照线粒体功能詹纳斯绿B（JGB）染色试剂盒说明书操作。
参考文献
[1]Sleep quality and quality of life in female shift‐working nurses[J].Ming‐FenShao,Yu‐ChingChou,Mei‐YuYeh,Wen‐ChiiTzeng.Journal of Advanced Nursing.2010(7)
[2]The roles of dopamine and serotonin,and of their receptors,in regulating sleep and waking[J].Jaime M.Monti,Héctor Jantos.Progress in Brain Research.2008
[3]Hepatocellular Dysfunction Induced by Nitric Oxide Production in Hepatocytes Isolated from Rats with Sepsis[J].Wei Tu,Sohei Satoi,Zhongtao Zhang,Hiroaki Kitade,Tadayoshi Okumura,A-Hon Kwon,Yasuo Kamiyama.Shock.2003(4)
[4]Association between mitochondrial dysfunction and severity and outcome of septic shock[J].David Brealey,Michael Brand,Iain Hargreaves,Simon Heales,John Land,Ryszard Smolenski,Nathan A Davies,Chris E Cooper,Mervyn Singer.The Lancet.2002(9328)
[5]许晓伍.基于线粒体途径探讨安寐汤抑制失眠大鼠皮质神经元兴奋机制[D].广州中医药大学,2013.