背景[1-3]
凝胶阻滞分析(EMSA)试剂盒(化学发光法)是一种通过Streptavidin-HRP及ECL检测试剂来实现化学发光检测Biotin标记的EMSA探针的检测试剂盒。同时本试剂盒也提供EMSA检测所需的结合缓冲液和上样缓冲液，及一些关键的相关试剂，可以实现非同位素的EMSA检测。
凝胶阻滞图
凝胶阻滞分析（Gel shift Assay，Gel Retardation）,该方法用来研究DNA与特异性蛋白的相互作用，通常是放射性标记的DNA片段与纯化蛋白，或提取物中的蛋白混合物相结合，然后在非变性凝胶中分析该产物。与游离DNA相比，蛋白-DNA复合物的迁移率将降低，因此，与游离DNA相对应，人们将观察到带中的“阻滞”。
原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合，电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢，即表现为相对滞后。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白，并可通过加入特异性的抗体（supershift）来检测特定的蛋白质，并可进行未知蛋白的鉴定。
凝胶阻滞分析(EMSA)试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3，这样比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。
凝胶阻滞分析(EMSA)试剂盒采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin，使检测结果背景更低灵敏度更高。EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)等有效成分。其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合，同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。
凝胶阻滞分析(EMSA)试剂盒可以用于20个蛋白和探针的结合反应，并足够检测至少2块有生物素标记EMSA探针的膜。
应用[4][5]
用于钝齿棒杆菌ArgR的凝胶阻滞实验及单增李斯特菌actA、inlB、p60表达载体的构建
构建了ArgR的重组表达菌株BL21（DE3）/pET22b-argR。在33℃,以IPTG诱导8h实现了ArgR高效可溶性表达。用纯化后的ArgR制备小鼠多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价达1：160000。Western blotting结果表明,ArgR重组蛋白在体外可自发形成具有生物活性的多聚体。
在钝齿棒杆菌精氨酸代谢途径中,可能受到ArgR调节的基因有六个：argC、argJ、argB、argG、argF以及carAB。为验证ArgR对以上基因上游DNA序列的结合作用,分别将其与ArgR进行凝胶阻滞实验,结果表明,ArgR对位于argB、argF以及carAB上游的DNA序列均有结合反应,其中ArgR对carAB上游的DNA序列结合能力最为显著。
实验通过PCR扩增获得LM actA、inlB、p60全长,并将克隆至原核表达载体pET22b（+）中,构建了重组表达载体pET22b（+）pET22b（+）-inlB以及pET22b（+）-p60,为大量表达单增李斯特菌特异性膜蛋白抗原奠定了实验基础。
参考文献
[1]Improvement of L-arginine production by overexpression of a bifunctional ornithine acetyltransferase in Corynebacterium crenatum.[J].Dou Wenfang,Xu Meijuan,Cai Dongmei,Zhang Xiaomei,Rao Zhiming,Xu Zhenghong.Applied biochemistry and biotechnology.2011(3-4)
[2]Interaction of transcriptional repressor ArgR with transcriptional regulator FarR at the argB promoter region in Corynebacterium glutamicum.[J].Lee Soo Youn,Park Jae-Min,Lee Jin Hyung,Chang Suk-Tai,Park Jin-Soo,Kim Yang-Hoon,Min Jiho.Applied and environmental microbiology.2011(3)
[3]Offering surprises:TCA cycle regulation in Corynebacterium glutamicum[J].Michael Bott.Trends in Microbiology.2007(9)
[4]Use of Monoclonal Antibodies That Recognize p60 for Identification of Listeria monocytogenes[J].Kang Y.Yu,Youngsoon Noh,Minsub Chung,Hong J.Park,Namseok Lee,Moonyeon Youn,Byeong Y.Jung,Byung S.Youn.Clin.Diagn.Lab.Immunol..2004(3)
[5]袁永.钝齿棒杆菌ArgR的凝胶阻滞实验及单增李斯特菌actA、inlB、p60表达载体的构建[D].南昌大学,2012.