【背景及概述】[1][2]
非洲加纳籽属于豆科、云实亚科、加纳籽属的灌木植物，原产于加纳、象牙海岸、科特迪瓦和多哥等西非国家。在西非地区，加纳籽有着悠久的民间药用史。其叶和叶汁可分别用来治疗外伤及与膀胱和肾脏相关的疾病；此外，加纳籽还可以用来治疗腹泻、呕吐、胃痛；而最广为人知的则是其抗菌和激发性欲的特性。近年来研究发现，加纳籽提取物的主要活性成分是5-羟基色氨酸。5-HTP是一种 氨基酸类物质，也是抑制性神经递质5-羟色胺的前体物质，能提高脑部5-HT浓度、抑制忧郁、促进褪黑素合成、改善睡眠质量等。
然而5-HTP的分布范围窄， 目前发现仅在加纳籽中有大量存在。鉴于5-HTP的良好活性，近年来，5-HTP在美国、英国和加拿大被当作膳食补充剂销售；我国对此类药物的需求量也在不断增加。由于非洲加纳籽资源有限，加之大量的采集和物流成本的不断增加， 致使5-HTP的生产成本居高不下。为了更好地可持续利用这一植物种质资源， 在我国热带和南亚热带地区引种驯化这一物种就显得尤为重要。
【提取方法】[1] [2]
分别称取4份300g加纳籽粉末于三角瓶中，依次加入5倍量25%、50%、75%、95%乙醇溶剂，50℃下水浴浸提12h，抽滤，浓缩提取液，获得加纳籽乙醇提取物。取50g加纳籽用15倍量蒸馏水于80℃下浸提2h，共提取2次，提取液经抽滤浓缩至40ml（生药量为1.25g·ml-1）后用4倍量无水乙醇搅拌均匀， 静置4h后，1500×g离心3次，弃去沉淀，上清液浓缩至干得样品1。将残渣用4倍量95%乙醇于60℃浸提24h后，经抽滤浓缩至干得样品2。取50g加纳籽直接用4倍量95%乙醇于60℃浸提24h后，经抽滤浓缩至干得样品3。取样品1、2、 3用适量甲醇溶解后，分别以石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1、正丁醇∶水∶乙酸＝１2∶5∶3为展开剂、 碘熏为显示剂进行TLC分析。
以晒干的加纳籽为原料，分别用25%、50%、75%、95%乙醇溶剂提取，提液浓缩至干， 收率依次为2.05％、20.51%、6.26%、3.15%。从收率来看，50%乙醇提取物最高，25%乙醇提取物最少。加纳籽乙醇提取物的TLC如图1所示。由图1可知，5-HTP、 样品1~3用小极性展开剂展开后发现其化学成分较少（图1a）；而用较大极性展开剂展开后发现其主要化学成分为5-HTP，其它成分较少（图1b）。
分离纳籽提取液中5-HTP方法：
确定001×7阳离子交换树脂为吸附分离加纳籽提取液中5-HTP的树脂，工艺为以4.0 mL/min 的上样体积流量上样，洗脱溶剂为质量分数为7.0%的氨水，洗脱体积流量为3.0 mL/min，洗脱体积为3BV，洗脱液收集体积为4BV，上样液中5-HTP的质量浓度为10.8 mg/mL，用稀盐酸调节上样液pH值为3.5。按照上述所确定的条件进行吸附和洗脱验证试验，取样品液进行上柱、吸附、洗脱，洗脱液浓缩结晶后获得的样品进行5-HTP 的量及灰分质量指标的检测分析， 其样品的色谱图见图1-c，结果5-HTP 质量分数分别为99.3%、 99.1%、 99.2%，灰分分别为0.06%、0.11%、0.07%，得率分别为 7.86%、 8.01%、7.98%。可以看出，获得的样品中5-HTP质量分数在 99.0%以上，其灰分质量分数低于1.0%，产品平均得率为7.95%，该产品质量符合市场要求，工艺适合规模化生产。得率＝提取物质量×提取物中 5-HTP 的质量分数/原料质量。
【药理作用】[1]
采用MTT法测定不同浓度的加纳籽乙醇提取物对肝癌细胞SMMC7721和 Bel7402的体外抑制效果，结果见表1。由表1可知，95%乙 醇 提 取 物 对SMMC7721 和Bel7402均有较好的抑制作用，对肝癌细胞半数抑制浓度(IC50) 分别为(124.05±11.35)μg·ml-1和(157.05±3.94)μg·ml-1，明显好于5-HTP， 而其它提取物抑制效果均不明显。该结果表明，加纳籽95%乙醇提取物中可能存在其它对肝癌细胞有较高抑制率的化学成分，也可能是其它化学成分对肝癌细胞产生了协同抑制效应。
由表2可知，加纳籽用25%、50%、75%、95%乙醇提取物、5-HTP及阳性对照Vc对DPPH自由基均有较好的清除能力，IC50分别为(0.18±0.14)μg•ml-1、(0.35±0.15)μg•ml-1、(0.28±0.07)μg•ml-1、(0.15±0.07)μg•ml-1、(6.06±2.37)μg•ml-1、(0.53±0.30)μg•ml-1，加纳籽乙醇提取物对DPPH自由基的清除能力比阳性对照Vc要强，说明加纳籽中存在自由基清除能力强的化学成分。虽有文献报道5-HTP具有一定的抗氧化性，但在本实验中其对DPPH自由基清除能力并不明显，可见加纳籽中存在其它对DPPH自由基有较高清除能力的化学成分，有待进一步研究。
【主要参考资料】
[1]郑志忠,谌迪,刘韶松,明艳林.非洲加纳籽乙醇提取物的生物活性研究[J].化学与生物工程,2016,33(01):33-35.
[1]冯建光.离子交换树脂分离纯化加纳籽中5-羟基色氨酸[J].中草药,2013,44(17):2410-2415.