干粉型LB培养基的应用

背景^[1-3]

干粉型LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增，达到使用要求。培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。通过培养工程菌，可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒，工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础。

配方：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g。使用时加入1000ml水，高压灭菌。

干粉型LB培养基

LB培养基是由美国科学家Giuseppe Bertani在1951年独立开发。但现在常用的LB配方是由Miller修改而成,主要是去掉Glucose并把NaCl浓度从0.5 g/L增加到10 g/L。本产品就是根据Miller配方制备的干粉型培养基,本产品加水灭菌后即得液体培养基,即可使用。

使用方法

1.配制：100mlLB培养基加入1~1.5g琼脂粉

2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。

3.倒板：一般15ml-20ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。

4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。ph值需要控制在7.4

应用^[4][5]

用于益生菌抑菌剂制备及应用研究

选取研究室保藏的23株益生乳杆菌,抑菌圈试验筛选出产抑菌剂的益生菌,16S rDNA方法对其进行菌种鉴定,单因素、PB（Plackett-Burman）试验及响应面法优化确定该菌株产抑菌剂的发酵条件和最适培养基,真空冷冻干燥制备益生菌抑菌剂粉末,将其用于香蕉和冷鲜猪肉保藏。

结果如下:1.以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、青霉、溶藻弧菌作为指示菌的抑菌圈试验结果发现,益生菌菌体对指示菌无抑制作用,离心去除益生菌菌体的发酵液（抑菌剂）对细菌有抑制作用,对青霉的抑制作用不明显。初筛及复筛获得了抑菌能力较强的益生乳杆菌L57,16S rDNA菌种鉴定为鼠李糖乳杆菌。

2. 抑菌试验结果表明,鼠李糖乳杆菌L57抑菌剂具有广谱性,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、溶藻弧菌、纳豆芽孢杆菌均有抑制作用,对青霉抑菌作用不明显,对黑曲霉、酿酒酵母和保拉迪酵母无抑制作用。排除有机酸、过氧化氢及胞外多糖的干扰,硫酸铵盐盐析初步确定,该抑菌剂中具有抑菌作用的物质是蛋白质或肽类。理化性质测定表明,该抑菌剂经胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后的抑菌活性好,对p H、温度和紫外线有良好的耐受性,抑菌活性显示pH最适范围为2.0-4.0。

3. 单因素、PB试验及响应面法优化了鼠李糖乳杆菌L57产抑菌剂的发酵条件和培养基组成。发酵条件为:培养时间21h,温度38℃,接种量5.0%,初始pH6.5,此条件下对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径分别为19.24mm和21.59mm,比对照组大肠杆菌抑菌圈直径（17.46mm）和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径（19.21mm）分别提高了10.3%和12.4%;优化培养基组成为:葡萄糖3.2%,大豆蛋白胨2.8%,乙酸钠0.7%,低聚半乳糖0.2%,吐温-80 2mL/L,磷酸氢二钾0.3%,硫酸锰0.005%,此条件得到该菌产抑菌剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径分别为19.36mm和21.97mm,比对照组大肠杆菌抑菌圈直径（12.35mm）和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径（15.64mm）分别提高了57%和41%。

4.鼠李糖乳杆菌L57的生长及产抑菌剂曲线表明,随着菌体的生长,抑菌活性增强,发酵20h后抑菌活性趋于平缓;加入15%的可溶性淀粉冷冻干燥制备的抑菌剂粉,复水还原后抑菌性能与未干燥抑菌剂无显著差异;Luria-Bertani（LB）培养基中抑菌剂冻干粉对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度（MIC）均为0.78g/L,最小杀菌浓度（MBC）分别为6.25 g/L和3.13 g/L。

参考文献

[1]Revalorization of winery by-products as source of natural preservatives obtained by means of green extraction techniques[J].J.M.Poveda,L.Loarce,M.Alarcón,M.C.Díaz-Maroto,M.E.Ala?ón.Industrial Crops&Products.2018

[2]The four-component aureocin A70 as a promising agent for food biopreservation[J].Patrícia Carlin Fagundes,Felipe Miceli de Farias,Olinda Cabral da Silva Santos,Juliana Aparecida Souza da Paz,Hilana Ceotto-Vigoder,Daniela Sales Alviano,Maria Teresa Villela Romanos,Maria do Carmo de Freire Bastos.International Journal of Food Microbiology.2016

[3]Current trends in natural preservatives for fresh sausage products[J].Celia J.Hugo,Arno Hugo.Trends in Food Science&Technology.2015(1)

[4]Development of a rice starch-based coating with antioxidant and microbe-barrier properties and study of its effect on tomatoes stored at room temperature[J].Deba Krishna Das,Himjyoti Dutta,Charu Lata Mahanta.LWT-Food Science and Technology.2013(1)