麦冬皂苷D的制备和含量检测

2021/8/31 10:17:37

背景及概述[1]

麦冬Ophiopogonjaponicus(Thunb.)Ker‑Gawl.又名沿阶草、书带草、麦门冬,为百合科沿阶草属多年生常绿草本植物,是一味常用于滋阴的中药,始于《神农本草经》,历代本草都有记载。麦冬具有养阴生津,润肺清心。可用于肺燥干咳,虚痨咳嗽,津伤口渴,心烦失眠,内热消渴,肠燥便秘,咽白喉等症。现代研究发现:麦冬含有甾体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等成分,药理实验表明麦冬皂苷类成分具有一定的抗心肌缺血、抗心律失常等作用。

麦冬皂苷D:C44H70O16,属于甾体皂苷类,易溶于乙醇和水,不溶于丙酮、石油醚等非极性溶剂。其对心脑血管系统方面具有显著的作用,如蒋风荣等发表的“麦冬皂苷D对过氧化氢造模的HUVEC保护作用机制研究”,该文献明确了麦冬皂苷D可以稳定线粒体膜电位,减少钙离子内流,增加细胞的活力,对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)有一定的保护作用。

制备[1]

取麦冬干燥药材500g,粉碎过40目筛,加入4L80%的乙醇溶液浸泡0.5小时,再置于微波装置中辐照提取15min,提取温度为60~70℃,微波装置功率设定为200W,提取液浓缩得浸膏68g,加150ml水分散,再加200ml水饱和正丁醇萃取2次,合并萃取液,用300ml丙酮沉淀,过滤,滤液蒸干得麦冬总皂苷11.8g。

将氯仿、甲醇、1%氨水按7∶13∶5的体积比量取,超声混合后加入分液漏斗中,静置使上、下相分层,取上相作为固定相,下相作为流动相,将上述黄色粉末用500ml下相溶解,再用上相泵满色谱柱,然后以2.0ml/min的流速泵入流动相,平衡后设定色谱仪转速为850r/min,通过进样阀进样,每次进样量为150mg,收集流出液,减压蒸干即得麦冬皂苷D2.7g,含量99.3%。

含量检测[2]

参麦注射液由红参、麦冬制成的复方中药制剂,其中麦冬为主要药味之一,在通常的高效液相分析中,不易得到分离度好的色谱图,难以准确测定,高效液相色谱不能准确测定其中麦冬皂苷D。采用本方法使大部分干扰测定的物质被有效除去,提高了测定的准确性。

1、试药、试剂及仪器

Agilent1260型高效液相色谱仪,配置四元泵,自动进样器,检测器(AltechELSD2000ES),柱温箱。参麦注射液(大理药业股份有限公司提供),麦冬皂苷D对照品(上海源叶生物科技有限公司提供,批号:SM0521KA13,纯度98.2%);ODS小柱(VARIAN,BONDELUTC18);甲醇(分析纯,天津化学试剂二厂);乙腈(色谱纯,Fisher公司),注射用水(自制)。

2、色谱条件

UItimateXB-C18色谱柱(4.6mm×250mm;5-Micron);柱温30℃,流速1.0ml/min,进样量20μl;检测器:检测器(AltechELSD2000ES),气体流量2.5L/min,漂逸管温度95℃;流动相,水:乙腈(48:52)。

3、对照品溶液的制备

分别精密称取麦冬皂苷D对照品适量,加甲醇溶解,制成浓度为麦冬皂苷D0.2mg/ml对照品溶液。

4、本供试品溶液的制备

精密量取参麦注射液10ml置于分液漏斗中,加水饱和正丁醇萃取4次,每次20ml,合并正丁醇液,水浴蒸干,残渣加水溶解,上处理好的ODS小柱,控制上样和洗脱过程流速为0.5ml/分钟,先用20ml水冲洗,再用50%甲醇水溶液20ml冲洗,最后用65%甲醇水溶液30ml冲洗,收集65%甲醇水溶液,水浴蒸干,残渣用甲醇转移至2ml容量瓶,定容至刻度,摇匀即得。

5、对比供试品溶液的制备

(1)精密量取参麦注射液10ml,水浴蒸干,残渣用甲醇转移至2ml容量瓶,定容至刻度,摇匀即得。

(2)精密量取参麦注射液10ml置于分液漏斗中,加水饱和正丁醇萃取4次,每次20ml,合并正丁醇液,水浴蒸干,残渣用甲醇转移至2ml容量瓶,定容至刻度,摇匀即得。

6、测定法

分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

参考文献

[1][中国发明]CN201010603888.X一种麦冬皂苷D的提取方法

[2][中国发明,中国发明授权]CN201310378711.8一种对参麦注射液中麦冬皂苷D含量的测定方法

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