背景及概述[1]
萘啶酮酸又称萘啶狄克酸或温吐曼龙，白色至淡黄色结晶性粉末，无臭，无味。熔点229～ 230℃，难溶于氯仿、醇、水、乙醚，系抗菌剂，用于治疗革兰氏阴性细菌所致的尿道感染，是喹诺酮类代抗菌药代表。由2-氨基-5-甲基吡啶与原甲酸乙酯及丙二酸二乙酯缩合成N-(2-甲基-5-氨基吡啶) 甲叉丙二酸二乙酯，经环合、水解得到7-甲基-1，8-萘啶-4-羟基- 3-羧酸，再用溴乙烷进行N-烷基化并异构制取。其作用机制是抑制细菌的DNA促旋酶、干扰DNA的合成，从而抑制生长期细菌的繁殖。抗菌谱窄，对多数G-杆菌有效，但对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)无效；对G+细菌和厌氧菌均无效。口服用。可治疗由大肠埃希氏菌(Escherichia coli)和变形杆菌(Proteus spp)等引起的尿路感染。细菌易对本品产生耐药性。
应用 [2-3]
1、用于制备一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧 菌复合增菌的选择性培养基
cn201510316647报道了将萘啶酮酸用于制备一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌复合增菌的选择性培养基。本发明的培养基能够同时对目标菌沙门氏菌、副溶血弧菌和单增李斯特菌进行复合增菌并抑制其他非目标菌，且对处于亚致死状态的目标菌抑制作用小，使亚致死状态的目标菌也能进行增菌，增菌效果好；本发明提供的培养基制备方法操作简单，效率高。
本发明的具体技术方案为：一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌复合增菌的选择性培养基，按重量份数计包括如下组分：胰蛋白胨15-20份，蛋白胨2-4份，氯化钠8-12份，磷酸二氢钠2-3份，葡萄糖2-3份，甘露醇2-3份，七叶苷0.01-0.03份，柠檬酸钠0.5-1.5份，脱脂奶粉4-6份，灭菌蒸馏水1000 份，1mol/l的氢氧化钾溶液0.1-1份，1mol/l的盐酸溶液0.1-1份，亚碲酸钾溶液0.8-1.2份，吖啶黄溶液0.8-1.2份，萘啶酮酸溶液0.8-1.2份。所述亚碲酸钾溶液由0.00005份亚碲酸钾和10份灭菌蒸馏水组成；所述吖啶黄溶液由0.1份吖啶黄和10份灭菌蒸馏水组成；所述萘啶酮酸溶液由0.01份萘啶酮酸和10份浓 度为0.05mol/l的氢氧化钠溶液组成。
在本发明的培养基中，以沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌为目标菌，胰蛋白 胨、蛋白胨、氯化钠和磷酸二氢钠作为基础培养基为菌类提供营养源。葡萄糖、甘露醇作为生长促进剂，能够促进菌类生长。脱脂奶粉作为复苏促进剂，能够促进处于亚致死状态的目标菌复苏。柠檬酸钠作为目标菌可以利用的碳源，而其对于其他众多菌类则无法被利用。七叶苷、亚碲酸钾溶液、吖啶黄溶液和萘啶酮酸溶液是作为抑制剂，它们具有选择性的抑制作用，对目标菌的抑制作用较小，对其他众多菌类的抑制效果较强。
本发明的培养基能够同时对目标菌沙门氏菌、副溶血弧菌和单增李斯特菌进行复合增菌并抑制其他非目标菌，且对处于亚致死状态的目标菌抑制作用小，使亚致死状态的目标菌也能进行增菌，增菌效果好。本发明提供的培养基制备方法操作简单，效率高，效果好。
2、制备选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂
cn201210058230.4提供了一种选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂，以解决幽门螺杆菌培养生长条件要求苛刻，培养过程繁琐、培养技术要求高，杂菌生长多的问题。本发明的另一目的是提供所述选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂制备方法。实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂，其配方组成为：万古霉素3～50 mg/l，萘啶酮酸5～10.0 mg/l，tmp3～5.0 mg/l，两性霉素1～2.0 mg/1, nisin 8～10 mg/1。进一步，所述选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂的制备方法，主要包括下列步骤：
1）培养基的配制：
培养基配方：930 ml/l脑心浸液培养基，80 ml/l胎牛血清，1.0 g/lβ‑cd，0.04 g/l ttc（四氮唑红），ph 7.2‑7.4；
1.1）按上述配方配制好培养基，装入500 ml锥形瓶(300ml/瓶)，用封口膜将瓶口封紧，121℃ 高压消毒15～30 min，待高压锅压力降至0后，取出培养瓶，自然冷却；
1.2）解冻绵羊血，56℃、30 min灭活补体(为防止多次开启，可用小瓶分装成10 ml小包装于‑2o℃保存备用)；
1.3）将步骤1.1）冷却至40℃左右的上述培养基倒入无菌培养皿中，加入预先配制好的选择性抗生素 (万古霉素3‑50 mg/l，萘啶酮酸5‑10.0 mg/l，tmp3‑5.0 mg/l，两性霉素1‑2.0 mg/1, nisin 8‑10 mg/1)和步骤1.2）解冻的绵羊血(8%～10%)（ml/100ml,体积分数）；再将该无菌培养皿放置15～30 min，自然凝固后尽快封闭培养基，为防止污染，瓶口开启时间尽可能短。；
2）细菌接种与培养：
2.1）用吸管吸取0.1ml hp菌悬液，滴于步骤1.3）的固体培养基上，用l形棒涂开；
2.2）将步骤2.1）已接种好的培养皿放入厌氧培养罐，盖紧顶口，使用气体发生袋；或采用抽气换气法，将培养罐内气压抽至0或接近0，立即冲入混合气体(5% o2，10% co2 ，85% n2 )，冲混合气体的速度不能太快，以免杂菌充入污染，侧口处塞一灭菌棉花团，可防止污染；
2.3）将步骤2.2）培养罐置于37℃ 恒温箱中培养，72 h后观察菌落生长情况；hp生长的湿度>9o%，为保证培养基的湿度，可在培养罐中放入装有适量水的小烧杯，以维持培养基湿度；
3）细菌的保存：
选取对数生长期(一般为培养48h)的hp进行保存；用接种环刮取培养菌于保存液中，调整细菌浓度(1×108～1×109cfu/ml)，保存液基质为脑心浸液和100%甘油；将菌液分装至0.5 ml ep管中，每管0.2～0.3 ml，置‑7o℃或液氮中保存。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
i、本发明制备以两性霉素b、萘啶酮酸、万古霉素、tmp及nisin的混合抑菌剂，在培养基中加入混合抑菌剂不但能减少枯草杆菌、革兰阳性球菌、霉菌等杂菌的污染，同时又能提供hp生长所需的胸腺嘧啶脱氧核苷抑制杂菌生长。
ii、本发明抑菌剂与现有文献资料的抑菌剂相比，加入nisin后明显提高了抑菌效果：a、两性霉素1‑2.0 mg/1、万古霉素3‑50 mg/l、萘啶酮酸5‑10 mg/l 、tmp3‑5.0 mg/l、多粘菌素b 5‑10 mg/l,有杂菌生长，抑制杂菌效果不明显；b、两性霉素1‑2.0 mg/1、万古霉素3‑50 mg/l、萘啶酮酸5‑10.0 mg/l、tmp3‑5.0 mg/l、nisin 5‑10 mg/1,无杂菌生长，抑制效果明显。
主要参考资料
[1] 微生物学词典
[2] cn201510316647.x一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌复合增菌的选择性培养基及其制备方法
[3] cn201210058230.4选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂及其制备方法