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血清「酸性磷酸酶」测定

发布日期:2021/10/18 15:49:15

酸性磷酸酶 (acid phosphatase, ACP) 是一组在酸性条件下水解磷酸单醋类化合物的酶。 ACP 存在于人体多种组织或细胞,主要有红细胞、血小板、脾脏、骨髓以及男性的前列腺等。男性血清中 ACP大约一半来自前列腺,男性血清的其他 ACP 和女性血清 ACP主要来自骨骼破骨细胞、红细胞等。

 ACP有多种,来自前列腺的ACP称前列腺ACP (p-ACP) , 可被右旋酒石酸抑制,其他不被酒石酸抑制,称酒石酸抵抗 ACP(tr-ACP)。 p-ACP 升高主要与前列腺肿瘤有关, tr-ACP 升高主要与骨溶解和再造有关。 ACP 测定主要采用活性测定,有多种方法。一种比色法以磷酸麝香草酚酞为底物,此底物对 p-ACP 有一定特异性,曾有较广泛应用。另一种方法是速率法,通过 一系列反应,连续监测有色物质的生成,易于自动 化,是目前常用方法。近年出现利用免疫分离的活性 测定方法,可特异性测定特定种类的 ACP。本节介绍目前应用较多的速率法。 

原理

血清 ACP 在酸性条件下水解 α-萘酚磷酸酯,生成 α-萘酚和磷酸,  α-萘酚与固红TR 反应生成有色物质,在 405nm 波长处有吸收。在底物过剩的情况下, α-萘酚的生成速率与血清 ACP 放度成正比,有色物质生成速率与 α-萘酚的生成速率成正比,因而可通过监测有色物质升高测定血清 ACP 活性浓度。 ACP 活性测定的酶促反应式如下: 

反应体系中加入 1,5-戊二醇等醇类物质作为磷酸接受体,以加速磷酸酯水解。可通过加和不加酒石酸,分别测定 tr-ACP 和总 ACP (t-ACP) 。 

试剂

主要试剂成分包括 α-萘酚磷酯、固红 TR 或相似物质、 1,5-戊二醇、枸橼酸缓冲液等, 测定 tr-ACP 时含酒石酸,测定 t-ACP 时不含酒石酸。 各商品试剂成分相似,各成分浓度及样品体积分数存在一定差异,详见各试剂说明书。 

操作

测定过程一般为,试剂与样品棍合后温育一段时间(如 5 分钟) ,随后监测一定时间 (1 -3 分钟)内吸收度( 405nm 左右)变化。反应温度 37℃。不同实验室具体测定条件会因所使用的仪器和试剂而异,在保证方法可靠的前提下,应按仪器和试剂说明书设定测定条件,进行定标品、空白样品和血清样品分析。 

结果计算

血清样品 ACP催化活性浓度可按有色物质消光系数计算或用定标品校准。

参考区间

不同方法参考区间不甚一致,一般成人血清 t-ACP参考上限 7U/L 左右, tr- ACP 5U/L 左右。

注意事项

血清 ACP 不稳定,血清分离后需尽快加入适量乙酸,降低血清 pH 至 5.4 ,以稳定 ACP。红细胞中含大量 ACP,需尽快分离血清,溶血样品不可用做 ACP 测定。

临床意义

血清 tr-ACP 主要是一个溶骨活动指标, Paget 病、甲状旁腺功能亢进、骨肿瘤或肿瘤骨转移、骨石化症等情况时血清 tr-ACP 可升高。与骨无关的一种血清 tr-ACP 升高的情况是 Gaucher 病, 毛细胞白血病的毛细胞表达 tr-ACP,毛细胞白血病时 tr-ACP 是组织化学指标,但血清 tr-ACP 一般不升高。前列腺癌,特别是有转移时,血清 ACP 或 p-ACP 明显升高。血清 ACP 或 p-ACP 曾广泛用于前列腺癌诊断或监测,但目前已基本被前列腺特异性抗原 (PSA) 取代。

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