背景及概述[1]
角鲨烯是由6个异戊二烯连接而成的高度不饱和的直链三萜类化合物，别名鲨萜、三十碳六烯、鱼肝油萜或角鲨油素，系统命名为2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，分子式为C30H50，常温下为淡黄色或无色油状液体。角鲨烯具有提高缺氧耐受力功能、抑制微生物生长、抗菌消炎、调节胆固醇代谢等生物活性功效。而且角鲨烯是一种具有抗衰老、抗癌作用的无毒性的强化剂。角鲨烯来源广泛，存在于微生物、植物种籽、微藻、鲨鱼肝脏及人体皮脂中。
制备[1-3]
报道一、
一种从裂殖壶菌中提取角鲨烯的方法，包括以下步骤：
S1、裂殖壶菌的培养：
S11、将裂殖壶菌转接于斜面，于25℃下培养3～4d，将裂殖壶菌活化，然后用接种环挑取活化的裂殖壶菌，接入一级种子培养基中以25℃、200r/min培养2d，得到一级种子，最后再取一级种子接入二级种子培养基中，以25℃、200r/min培养2d，得到二级种子；其中，一级种子培养基和二级种子培养基均由30g/L葡萄糖、10g/L酵母提取物和15g/L矿物质组成；矿物质由10g/LNaCl、0.5g/LCaCl2·2H2O、1.5g/LMgSO4·7H2O、1.25g/LK2SO4、0.75g/LKH2PO4、0.7g/L(NH4)2SO4和0.3g/LFeSO4·7H2O组成；
S12、将二级种子按照6％的接种量转入发酵机构中的发酵培养基进行发酵培养，罐压0.025MPa，通气量5L/min，搅拌速度40r/min，发酵6d，得到发酵液；其中，发酵培养基由120g/L葡萄糖、10g/L酵母提取物、30g/L矿物质和0.15g/L复合维生素组成，矿物质由18g/LNaCl、1.5g/LCaCl2·2H2O、3.5g/LMgSO4·7H2O、2.25g/LK2SO4、1.75g/LKH2PO4、2g/L(NH4)2SO4和1g/LFeSO4·7H2O组成，复合纤维素由60mg/L维生素B6、30mg/L维生素B12、20mg/L核黄素、10mg/L烟酸和30mg/L叶酸组成；在发酵培养过程中分批流加葡萄糖，每隔8～12h加一次，每次加30g/L；
S2、裂殖壶菌的破壁：
将步骤S12得到的发酵液转入酶解机构中，往其加入碱性蛋白酶，对裂殖壶菌进行酶解破壁，酶解温度为63℃，pH为7.8，酶解时间为6h；
S3、角鲨烯的提取：
S31、在步骤S2破壁后得到的菌液中加入无水乙醇，菌液和无水乙醇的体积比为1：1.2，经过离心机构振荡离心分离除去上清液水-乙醇相，收集底层菌泥；
S32、在底层菌泥中加入正己烷，底层菌泥和正己烷的体积比为1：1.15，经离心机构振荡离心收集上清液，重复若干次，直到上清液无色透明，最后蒸发去除正己烷，收集得到角鲨烯粗品；
S4、角鲨烯的纯化：
将步骤S3得到的角鲨烯粗品进行脱胶、脱酸、漂白和脱臭处理，得到纯化的角鲨烯。
报道二、
a、取新鲜油茶籽300公斤，用清水洗净、凉干、切碎后置入提取罐中；
b、向罐中加入1.5-2.4吨85％的乙醇(重量含量)，加热(温度为60-70℃)回流提取2-3小时，滤出浸提液，另加入1.5-2.4吨85％的乙醇(重量含量)，又煮沸浸提2-3小时，滤出浸提液后弃渣；合并两次浸提液，备用；
c、将上述备用的浸提液加热(温度为60-70℃)浓缩，回收乙醇，收集浓缩液200升备用；
d、向上述备用的浓缩液中加入0.4-1.0mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液(氢氧化钠的用量为0.3-0.8公斤，甲醇的用量为20升)共20升，然后，将其置于70℃的水浴中，在氮气保护下回流反应4小时，冷却6小时，溶液与沉淀分离，甲酯化反应完成，滤出混合液备用；
e、将上述备用的混合液经0.01mol/L配位剂-硼砂反应，采用大孔树脂色谱分离纯化，并采用50-70％乙醇(重量含量)洗脱，乙醇的用量为2个柱体积，然后收集乙醇洗脱液备用；
f、将上述备用的乙醇洗脱液在60-70℃条件下加热浓缩，回收乙醇，得无乙醇浓缩液200升备用；
g、向上述备用的无乙醇浓缩液中加入200-400升的石油醚，常温萃取0.5-1小时，滤出萃取液；再加入200-400升的石油醚，常温萃取0.5-1小时，滤出萃取液，然后，合并两次萃取液备用；
h、将上述备用的萃取液用400-800升的清水分为2-3次进行洗涤，洗涤后，收集上清液(即：石油醚溶液)备用；
i、将上述备用的上清液(即：石油醚溶液)在30-40℃条件下加热浓缩，回收石油醚，得角鲨烯粗油8公斤备用；
j、将上述备用的角鲨烯粗油进行超临界CO2萃取，得角鲨烯精油(大约为1公斤左右)，备用；
k、将上述制得的角鲨烯精油用气相色谱法测试，若角鲨烯含量≥80％，即为成品，若角鲨烯含量≤80％，则重复上述第j步骤。
L、当上述制得的角鲨烯精油中的角鲨烯含量≥80％后，即可用于制作茶油角鲨烯软胶囊：
①取明胶、甘油、水按1.0∶0.4∶0.6的比例(重量配比)制备成胶囊壳，备用；
②按重量百分比份额分别取：
角鲨烯含量≥80％的角鲨烯精油87份、聚乙二醇4005份、蜂蜡3份、磷脂5份，合计为100份，混合均匀，灌装于胶囊壳中，即制得茶油角鲨烯软胶囊成品。
报道三、
一种络合提取角鲨烯的工艺，该方法包括如下步骤：
(1)备料：将1kg新鲜油茶树的种仁，用清水洗去表面附着的污物，去皮壳破碎；所得物与石油醚按1:5质量比混合超声(160W，30min，3次)，合并提取液，过滤，经减压浓缩获得山茶油脂溶性物质浓缩液(其中角鲨烯含量10g/L)；
(2)提取：将步骤(1)得到的山茶油脂溶性物质浓缩液与氢氧化钠的甲醇溶液混合，50℃水浴加热、搅拌回流2h，其中，氢氧化钠浓度0.7mol/L，山茶油脂溶性物质浓缩液与氢氧化钠的甲醇溶液的体积比为1：20，通过皂化和甲酯化反应除去脂肪酸，再用石油醚提取角鲨烯，即角鲨烯粗品；
(3)络合：将步骤(2)得到的角鲨烯粗品(其中，角鲨烯含量8200μg/mL)和0.6mol/L硝酸银-65v/v％甲醇水溶液等体积混合，使得角鲨烯粗品中的角鲨烯与硝酸银的摩尔比为1：30；在0℃下，振荡或搅拌进行络合反应12h；
(4)解离：低温下，静置、分液，获得中间产物银离子-角鲨烯络合物的水溶液，即络合后的水相，加入等体积石油醚；在50℃恒温水浴锅中加热回流，解离反应80min；得到较纯的含角鲨烯有机溶液；
(5)纯化：将步骤(4)得到的较纯的含角鲨烯石油醚溶液，用6.15mol/LNaCl水溶液清洗，在50℃，0.05Mpa条件下减压蒸馏，回收石油醚；再次蒸馏水清洗后，在20℃、500mmHg条件下真空干燥7h，即得到5.2g角鲨烯精品，其含量接近93％，总收率88.3％。
参考文献
[1][中国发明]CN202111006960.5一种从裂殖壶菌中提取角鲨烯的方法及角鲨烯在保湿抗衰老化妆品中的应用
[2][中国发明]CN201110027119.4以油茶籽为原料提取角鲨烯的方法及茶油角鲨烯软胶囊
[3][中国发明,中国发明授权]CN201410375211.3一种络合提取角鲨烯的工艺