背景[1-3]
内脂素试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中内脂素（Visfatin）的含量。
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人内脂素（Visfatin）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人内脂素（Visfatin）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
内脂素试剂盒
样本处理及要求
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
8. 实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
应用[4][5]
用于网膜素-1、内脂素、谷氨酰转肽酶与2型糖尿病患者CIMT的相关性分析研究
通过测定2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者的血清网膜素-1、内脂素、谷氨酰转肽酶（Glutamyl transpeptidase,GGT）、颈动脉内膜中层厚度（carotid intima media thickness,CIMT）,探究T2DM患者血清网膜素-1、内脂素、GGT与CIMT的相关性,影响CIMT的危险因素,为临床诊断及疾病诊治提供检测方法。
方法:连续收集T2DM患者,共116例,依据CIMT分为增厚组（CIMT≥0.9mm,n=58）、非增厚组（CIMT<0.9mm,n=58）。收集这两组受试者一般资料,包括:年龄、性别、身高、体重、收缩压（systolic blood pressure,SBP）、舒张压（diastolic blood pressure,DBP）,计算体重除以身高的平方,得到身体质量指数（Body Mass Index,BMI）,测量糖化血红蛋白（hemoglobin A1c,Hb Alc）、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、餐后2小时血糖（2-hour postprandial blood glucose,2h PG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、甘油三酯（total triglyceride,TG）、空腹C肽（fasting C-peptide）及餐后2小时C肽（C-peptide at 2 hours after meal）,检测生化全项中GGT,测量CIMT。通过酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清网膜素-1、内脂素。
对比两组受试者不同组间临床指标的差别。将CIMT与网膜素-1、内脂素、GGT进行相关性分析。以年龄、网膜素-1、内脂素为自变量,以CIMT是否增厚为因变量,了解CIMT的影响因素。
结果:1.两组一般资料及检测数据比较两组受试者一般资料（身高、体重、性别、BMI、SBP、DBP）之间比较,差异无统计学意义（P>0.05）;两组间检测数据（FBG、2h PG、Hb A1c、TC、LDL-C、HDL-C、TG、空腹C肽、餐后2小时C肽、GGT）之间比较,差异无统计学意义（P>0.05）；
2. T2DM患者CIMT与网膜素-1、内脂素、GGT的相关性分析结果CIMT与内脂素具有正相关关系,与网膜素-1具有负相关关系,与GGT无相关关系。
3. T2DM患者网膜素-1、内脂素的相关性分析结果网膜素-1与内脂素具有负相关关系。
4.Logistic回归分析T2DM患者CIMT的影响因素以CIMT是否增厚为因变量,以年龄、网膜素-1、内脂素等为自变量,进行Logistic回归分析。结果显示:内脂素是T2DM患者CIMT增厚的独立危险因素。
参考文献
[1]Adipose tissue dysfunction and metabolic disorders:Is it possible to predict who will develop type 2 diabetes mellitus?Role of markErs in the progreSsion of dIabeteS in obese paTIeNts（The RESISTIN trial）[J].Giuseppe Derosa,Gabriele Catena,Giovanni Gaudio,Angela D’Angelo,Pamela Maffioli.Cytokine.2020(C)
[2]Gamma-glutamyl transpeptidase（γ-GTP）has an ambivalent association with hypertension and atherosclerosis among elderly Japanese men:a cross-sectional study.[J].Shimizu Yuji,Kawashiri Shin-Ya,Kiyoura Kairi,Nobusue Kenichi,Yamanashi Hirotomo,Nagata Yasuhiro,Maeda Takahiro.Environmental health and preventive medicine.2019(1)
[3]Plasma omentin levels are associated with vascular endothelial function in patients with type 2 diabetes at elevated cardiovascular risk[J].Mariko Hayashi,Tomoaki Morioka,Masami Hatamori,Yoshinori Kakutani,Yuko Yamazaki,Masafumi Kurajoh,Koka Motoyama,Katsuhito Mori,Shinya Fukumoto,Atsushi Shioi,Tetsuo Shoji,Masanori Emoto,Masaaki Inaba.Diabetes Research and Clinical Practice.2019
[4]Adipokine Visfatin’s Role in Pathogenesis of Diabesity and Related Metabolic Derangements[J].B.Kumari,U.C.S.Yadav.Current Molecular Medicine.2018(2)
[5]王楠.网膜素-1、内脂素、谷氨酰转肽酶与2型糖尿病患者CIMT的相关性分析[D].承德医学院,2020.