背景[1-3]
犬高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒用于测定血清，血浆及相关液体等样本中高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)的含量。
实验原理:
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
犬高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
应用[4][5]
用于高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在过敏性紫癜患儿血清中的表达及临床意义研究
检测过敏性紫癜（Henoch-Schonlein purpura,HSP）患儿外周血高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达水平,分析其与实验室指标相关性,初步探讨HMGB1在HSP发病中的作用,为今后HSP的临床治疗提供理论依据。
方法:采用Real-time PCR法检测过敏性紫癜患儿21例（HSP组）、紫癜性肾炎患儿16例（HSPN组）及对照组儿童22例外周血HMGB1 m RNA相对表达量,检测HSP组及HSPN组患儿血清白细胞计数（WBC）、中性粒细胞百分比（NE）、C反应蛋白（CRP）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、血小板（PLT）、D-二聚体、免疫球蛋白A（Ig A）等实验室指标。
结果:（1）HSPN组、HSP组及对照组儿童外周血HMGB1m RNA相对表达量分别为15.88（11.5461.34）、9.65（3.8026.72）、1.01（1.001.06）,HSPN组HMGB1 m RNA表达量高于HSP组及对照组,HSP组其表达量高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）;
（2）HSP组各分型中混合型、腹型、单纯型其外周血HMGB1 m RNA表达量分别为18.14（10.5428.97）、12.19（4.9332.60）、2.93（0.885.69）,其中混合型及腹型HSP患儿表达量高于单纯型HSP患儿,差异有统计学意义（P<0.05）,混合型患儿表达量高于腹型患儿,但差异无统计学意义（P>0.05）;
（3）HSP组及HSPN组患儿外周血HMGB1 m RNA表达量与WBC（r=0.89）、NE（r=0.93）、CRP（r=0.73）、IL-6（r=0.82）、TNF-a（r=0.94）、PLT（r=0.78）、D-二聚体（r=0.59）、Ig A（r=0.64）等指标呈正相关,均P<0.05。
结论:HSPN组与HSP组外周血HMGB1 m RNA表达量明显高于对照组,表明HMGB1可能参与了HSP发病且与肾损害有关;HSP组患儿各分型中混合型与腹型患儿HMGB1 m RNA表达量明显高于单纯型患儿,推测HMGB1可作为HSP疾病严重程度评估指标;试验组外周血HMGB1与血清WBC、NE、CRP、IL-6、TNF-a、PLT、D-二聚体等呈正相关,推测HMGB1参与疾病炎症及高凝状态。
参考文献
[1]The Role of Endothelial Dysfunction and Inflammation in Chronic Venous Disease[J].R.Castro-Ferreira,R.Cardoso,A.Leite-Moreira,A.Mansilha.Journal of Vascular Surgery:Venous and Lymphatic.2018(4)
[2]Inflammation and thrombosis:roles of neutrophils,platelets and endothelial cells and their interactions in thrombus formation during sepsis.[J].Iba T,Levy J H.Journal of thrombosis and haemostasis:JTH.2018(2)
[3]Enzymatic sialylation of IgA1 O-glycans:implications for studies of IgA nephropathy.[J].Kazuo Takahashi,Milan Raska,Milada Stuchlova Horynova,Stacy D Hall,Knud Poulsen,Mogens Kilian,Yoshiyuki Hiki,Yukio Yuzawa,Zina Moldoveanu,Bruce A Julian,Matthew B Renfrow,Jan Novak.PLoS ONE.2017(2)
[4]Relationship between immune parameters and organ involvement in children with Henoch-Schonlein purpura.[J].Yan-xiang Pan,Qing Ye,Wen-xia Shao,Shi-qiang Shang,Jian-hua Mao,Ting Zhang,Hong-qiang Shen,Ning Zhao.PLoS ONE.2017(12)
[5]米热阿依·买买提依明.高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在过敏性紫癜患儿血清中的表达及临床意义[D].新疆医科大学,2021.