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脂联素受体1抗体的应用

发布日期:2022/8/5 9:47:00

背景[1-3]

脂联素受体1抗体是一类可以特异性结合脂联素受体1的多克隆抗体,主要用于体外检测脂联素受体1的免疫学实验。

脂联素(adiponectin)是由骨髓中的脂肪细胞、LepR+基质细胞合成和分泌,可以通过多种机制如调节糖和脂肪代谢抑制巨噬细胞、NK细胞等的激活、减少炎症因子诸如IFN-γ和TNF的生成,从而抑制炎症。对于无特定病原的小鼠,脂联素缺乏并不会影响造血干细胞(haematopoietic stem cell,HSC)或者造血,但是当细菌感染后,脂联素会通过抑制TNF表达促进造血干祖细胞的增殖,同时还可以促进清髓小鼠的HSC增殖。

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脂联素受体1抗体免疫组化

迄今为止,发现的脂联素受体有3个,分别为脂联素受体1、脂联素受体2、T-钙黏素。其中,Yamau-chi等发现了脂联素的2个受体,分别命名为脂联素受体1和脂联素受体2。脂联素受体具有7次跨膜结构域,但与G蛋白偶联受体家族结构不同,其N端位于膜内,C端位于膜外,可与脂联素受体结合。脂联素受体1主要在骨骼肌细胞表达,是球形脂联素的高亲和受体及全长脂联素的低亲和受体,与腺苷激酶(AMPK)有关;而脂联素受体2主要在肝细胞表达,是全长脂联素和球形脂联素的中等亲和受体,能激活PPAR。T-钙黏素主要在内皮细胞及平滑肌中表达,主要作用是与心脏、肌肉和血管等组织的脂联素结合。

T-钙黏素敲除小鼠血液中的脂联素水平较正常小鼠升高4倍,而心脏、血管中的T钙黏素表达减少,经过重组脂联素治疗后,T-钙黏素在细胞表面的表达可以恢复正常水平。由于脂联素与其受体结合后发挥了多种生物学作用,所以任何影响脂联素受体表达的因素均将影响脂联素生物学效应的发挥及其相关性疾病的发生和发展。

应用[4][5]

用于器官培养转录性上调大鼠肠系膜上动脉平滑肌细胞脂联素受体1表达研究

心血管疾病(CVD)是一组以心脏或血管异常为主要特征的循环系统疾病,严重危害我国乃至世界居民健康。动脉粥样硬化(AS)是血管壁的慢性炎症性疾病,是CVD的主要病理基础。炎症是导致动脉粥样硬化的血管内皮损伤和血管平滑肌细胞(VSMC)功能异常的关键环节。脂联素信号通路具有胰岛素增敏、抗炎、抗动脉粥样硬化、促进血管生成的作用。

借助器官培养模型,主要目的是研究器官培养对VSMCs上AdipoR1介导的血管功能以及AdipoR1的表达是否有影响,并探讨其内在机制。

方法:大鼠肠系膜动脉血管分离且去除内皮细胞后构建体外器官培养模型,血管张力描记系统(Myograph)检测血管舒张功能,Western blot、免疫组织化学染色(IHC)检测组织蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织mRNA的表达。

结果:1.器官培养对于VSMCs上AdipoR1介导的血管功能的影响:Myograph结果显示,器官培养增强AdipoR1介导的血管舒张,且具有时间依赖性。

2. 器官培养后VSMCs上AdipoR1的表达:Western blot和IHC结果显示器官培养增强AdipoR1蛋白的表达;qPCR结果显示AdipoR1 mRNA的表达OC组多于Fr组,具有时间依赖性。

3. 器官培养在转录或翻译水平影响AdipoR1的表达:在器官培养过程中加入放线菌素D(AcD)抑制转录,Myograph结果显示,AcD组的AdipoR1介导的血管舒张明显弱于Vehicle组;qPCR结果显示AcD抑制AdipoR1 mRNA的表达;在器官培养过程中加入放线菌酮(CHX)抑制蛋白质翻译,Western blot和IHC结果结果显示,CHX并不影响AdipoR1的蛋白表达。

4. 器官培养对AdipoR1调节的细胞内信号转导途径:Myograph结果显示,器官培养中加入MAPK或NF-κB通路抑制剂并不影响AdipoR1介导的血管舒张功能;Western blot和半定量结果显示,各抑制剂组与Vehicle组相比均无明显差异;qPCR结果显示,AdipoR1 mRNA的表达与Vehicle组无差异。

结论:大鼠肠系膜动脉经体外器官培养后,AdipoR1介导的血管舒张反应增强,VSMCs上AdipoR1的mRNA和蛋白表达均上调,但与细胞内信号转导途径MAPK ERK1/2和p38通路以及NF-κB通路激活无关。

参考文献

[1]AdipoRon:A Novel Insulin Sensitizer in Various Complications and the Underlying Mechanisms:A Review.[J].Bhat Ishfaq Ahmad,Kabeer Shaheen Wasil,Reza Mohammad Irshad,Mir Reyaz Hassan,Dar Muhammad Ovais.Current molecular pharmacology.2020(2)

[2]Nucleolin promotes Ang II-induced phenotypic transformation of vascular smooth muscle cells by regulating EGF and PDGF-BB.[J].Fang Li,Wang Kang-Kai,Zhang Peng-Fei,Li Tao,Xiao Zhi-Lin,Yang Mei,Yu Zai-Xin.Journal of cellular and molecular medicine.2020(2)

[3]A molecular toolbox for studying protein degradation in mammalian cells.[J].Eldeeb Mohamed A,Siva-Piragasam Ramanaguru,Ragheb Mohamed A,Esmaili Mansoore,Salla Mohamed,Fahlman Richard P.Journal of neurochemistry.2019(4)

[4]The Adiponectin-AdipoR1 Axis Mediates Tumor Progression and Tyrosine Kinase Inhibitor Resistance in Metastatic Renal Cell Carcinoma[J].Guangxi Sun,Xingming Zhang,Zhenhua Liu,Sha Zhu,Pengfei Shen,Haoran Zhang,Mengni Zhang,Ni Chen,Jinge Zhao,Junru Chen,Jiandong Liu,Jindong Dai,Zhipeng Wang,Xudong Zhu,Yufang Wang,Hao Zeng.Neoplasia.2019(9)

[5]张姗姗.器官培养转录性上调大鼠肠系膜上动脉平滑肌细胞脂联素受体1表达[D].厦门大学,2020.

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