紫菀酮的提取方法及应用

2019/12/20 7:42:38

背景及概述[1][2]

紫菀酮是从一种常见菊科植物—紫菀的根及根茎中提取的。传统医学认为其性温,味苦、辛,润肺下气,具有消痰止咳之功效,常用于用于治疗痰多喘咳、新久咳嗽、劳嗽咳血之症。提取紫菀酮工艺,公开较少,多是采用90-95%乙醇提取,浓缩液用石油醚萃取,硅胶柱反复分离得到紫菀酮。此外还有采用超临界CO2萃取工艺的,可得到含量80%的紫菀酮。此种方法虽然简单、清洁无污染,但是设备一次性投资高,提取量较少,也不适合工业化生产。

结构

提取方法[1][2]

一种从牛大力中提取紫菀酮的工艺,包括以下步骤:

S1:将牛大力进行粉碎并过筛子,制得牛大力粉末;

S2:向步骤S1制得的牛大力粉末中加入乙醇,在水浴条件下回流提取2-3次,每次 提取时长为2.1-2.5h,提取完全后合并提取液,调节提取液的pH值至4.2-4.6,温度控制为 45-50℃,通过活性炭脱色除杂,过滤后制得一次脱色液;

S3:将步骤S2制得的一次脱色液浓缩干燥,制得浸提膏,采用于浸提膏5.5-6倍体 积的40-45℃的水进行溶解,采用无水乙酸乙酯溶剂进行萃取2-3次,继续用无水乙酸乙酯 进行2-3次结晶处理,结晶过程中固液比为1:4.3-5.1(W/V),制得结晶粗品;

S4:将步骤S3制得的粗晶经62%-75%的乙醇溶解,调节溶液的pH值至4.2-4.6,温 度控制为45-50℃,通过活性炭脱色除杂,过滤后制得二次脱色液;

S5:将步骤S4制得的二次脱色液浓缩至每毫升中含紫菀酮3%-10%,采用大孔吸 附树脂分离提纯制得紫菀酮的液体,条件为:解析剂为48%-60%的乙醇溶液,其用量是大 孔吸附树脂体积的1.6-3.1倍,水洗区为去离子水,大孔吸附树脂吸附再生溶剂为2.6%- 5.8%的KOH溶液,吸附区流速6-10BV/h,解吸区流速10-20BV/h,水洗区流速20-25BV/h,再 生区流速6-10BV/h,切换时间为700-750s,温度为44-50℃,压力为0.5-0.8MPa;

S6:将步骤S5制得的紫菀酮液体进行浓缩后结晶,所得晶体在温度为40-43℃下真 空干燥,制得紫菀酮。

方法2:一种从紫菀中提取紫菀酮的方法,工艺简单,易于工业化生产。是通过以下技术方案来实现的:取紫菀药材粉碎,加5-7倍量80-90%甲醇回流提取2-3次,提取液加入活性炭脱色,趁热过滤,浓缩至醇浓度30-50%放置结晶,结晶物滤出用碱性醇溶液溶解,滤过调节pH2-5放置沉淀,滤出沉淀物再用碱性醇溶液溶解,滤过调节至中性,静置沉淀,滤出乙醇回流溶解重结晶2-3次,干燥即得。

应用[3-4]

紫菀酮能显著抑制小鼠的咳嗽反应,有研究探讨紫菀酮体外抗炎作用及其机制。采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎性反应模型,用紫菀酮对其进行干预,实验结束后,Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-ERK1/2、IκBα和i NOS蛋白的表达。结果显示与LPS组比较,紫菀酮可显著下调LPS所致炎性RAW264.7巨噬细胞中p-ERK1/2和i NOS蛋白表达(P<0.05),升高IκBα蛋白的表达(P<0.05)。因此紫菀酮抗炎作用机制与其下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平,减少IκBα蛋白磷酸化降解和抑制i NOS蛋白表达等环节有关。

还有研究 利用脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,通过紫菀酮对其进行干预,采用Sun BioTMAm-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测紫菀酮对RAW264.7巨噬细胞增殖的影响;Griess法检测细胞培养上清液中NO含量;ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果显示与空白组比较,50μmol·L-1紫菀酮组RAW264.7巨噬细胞的增殖抑制率明显高于空白组,0.1,1,10,20,30μmol·L-1紫菀酮组RAW264.7巨噬细胞的增殖抑制率无显著性差异;10,30μmol·L-1紫菀酮组NO释放量均显著低于脂多糖组;1,10,30μmol·L-1紫菀酮组IL-1β和TNF-α释放量均显著低于脂多糖组。因此紫菀酮呈剂量依赖性抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性细胞因子IL-1β,TNF-α及NO的释放,具有体外抗炎作用。

主要参考资料

[1] CN201710296816.7 一种从牛大力中提取紫菀酮的工艺

[2] CN201110151680.3 一种从紫菀中提取紫菀酮的方法

[3] 紫菀酮基于NFB信号通路的体外抗炎机制研究

[4] 紫菀酮对脂多糖诱导巨噬细胞释放IL-1β,TNF-α及NO的影响

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