蚕蛹蛋白胨的应用

2023/9/20 9:06:15

背景[1-3]

蚕蛹蛋白胨是一种特殊的生物试剂,主要是从蚕蛹中提取的蛋白质,经过特定的工艺处理后制成。它主要用于各种生物实验中,作为细胞培养基的添加成分,为细胞提供更加丰富的营养物质。

蚕蛹蛋白胨具有较高的纯度和生物活性,能够促进细胞增殖和分化,提高实验研究结果的可靠性。此外,蚕蛹蛋白胨还富含各种氨基酸、蛋白质、微量元素等营养成分,有利于促进细胞生长发育和功能表达。

蚕蛹蛋白胨.png

蚕蛹蛋白胨

在制备蚕蛹蛋白胨的过程中,需要将蚕蛹进行浸泡、搅拌、离心、干燥等操作,最终得到的产品呈淡黄色或淡褐色。不同厂家生产的蚕蛹蛋白胨在外观、成分和用途上略有差异,因此需要根据具体使用需求来选择合适的品牌和规格。

蛋白胨是有机化合物。蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂,具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。在胃内蛋白质的初步消化产物之一就是蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物,也含有一些维生素和糖类。

它可以作为微生物培养基的主要原料,在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大,可以用来治疗消化道疾病;不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽,因此存在着各种蛋白胨,一般来说,用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白(酪蛋白、肉类)、植物蛋白(豆类)、微生物蛋白(酵母)等三种。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。

应用[4-5]

蚕蛹蛋白胨可以用于产DNJ细菌菌株的筛选、鉴定及发酵工艺优化

研究筛选出一株产DNJ的细菌菌株,对其进行了鉴定,优化了该菌株产DNJ的发酵条件和培养基,利用脱脂蚕蛹粉制备蚕蛹蛋白胨来替代市售蛋白胨用于发酵罐扩大发酵。

利用琼脂平板法和反相高效液相色谱法从桑园土壤中筛选产DNJ菌株,281个菌株中筛选出一株产DNJ的细菌菌株,其产量约为80.22mg/L,并命名其为WB-1。对筛选出的细菌菌株WB-1进行了生理生化和分子生物学鉴定。菌落呈米白色,菌落表面湿润、光滑,边缘整齐,微隆起。菌株属于好氧菌,无运动性,能水解利用淀粉,能利用柠檬酸盐作为单一碳源,能分解过氧化氢,不产H2S,明胶液化、苯丙氨酸脱氨酶以及甲基红试验都呈阴性。

利用PCR法扩增了16srDNA片段,序列测定后检索NCBI数据库,序列与球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericus)亲缘关系最近,因此确定我们分离的菌株WB-1为赖氨酸芽孢杆菌。对该菌株的生长曲线进行了测定,得出其各个生长阶段分别为:04h处于迟滞期,414h处于对数期,1422h处于稳定期,22h以后进入衰亡期。

利用单因素实验确定了摇瓶发酵的条件及其培养基组成的基本成分。摇瓶发酵条件为:发酵温度为30℃,发酵初始pH为6.5,摇床转速为180rpm,装液量为30mL,发酵时间2d。通过PB试验、Box-Behnken试验设计依次对菌株WB-1发酵产DNJ的培养基和培养条件进行了多因素优化,得到优化后的条件为:葡萄糖0.5%、蔗糖0.3%、牛肉膏0.5%、蛋白胨0.795%、MgSO40.255%、NaCl0.05%,装液量38mL,在此条件下进行发酵可得DNJ产量为184.95mg/L,所得的DNJ产量较优化前的基础性培养基提高了1.31倍。

酶解脱脂蚕蛹粉制备蚕蛹蛋白胨,将其与市售蛋白胨复合培养菌株WB-1,结果发现蚕蛹蛋白胨的添加能延缓该菌株进入衰亡期。利用自制蚕蛹蛋白胨替代蛋白胨进行DNJ发酵试验,确定了其添加量为0.75%。将菌株WB-1进行5L发酵罐的放大发酵试验,每隔一定时间取适量发酵液,分别测定发酵液的OD600值以及DNJ含量,绘制其在发酵罐内培养时的生长曲线图以及不同发酵时间时DNJ产量的变化图,结果表明当发酵50h时进行放罐,可获得较高的DNJ产量。

参考文献

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[2]Effects of sources of carbon and nitrogen on production ofα-glucosidase inhibitor by a newly isolated strain of Bacillus subtilis B2.Yun-Ping Zhu;;Li-Jun Yin;;Yong-Qiang Cheng;;Kohji Yamaki;;Yutaka Mori;;Yi-Cheng Su;;Li-Te Li.Food Chemistry,2008

[3]A statistical approach to study the interactive effects of process parameters on succinic acid production from Bacteroides fragilis.Jasmine Isar;;Lata Agarwal;;Saurabh Saran;;Rekha Kaushik;;Rajendra Kumar Saxena.Anaerobe,2007

[4]Box-Behnken design:An alternative for the optimization of analytical methods..Analytica Chimica Acta,2007

[5]陈华.产DNJ细菌菌株的筛选、鉴定及发酵工艺优化[D].合肥工业大学,2014.

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