背景及概述[1]
去甲基蟛蜞内酯（DWEL）和蟛蜞菊内酯为墨旱莲的主要成分和可测定成分，具有抑制乳腺癌细胞的活性，对香烟烟雾干预NHBE细胞损伤的保护作用。NHBE是吸入的空气和人体肺内组织之间的屏障，对空气中的化学物质的刺激比较敏感。CS刺激NHBE细胞后，会引起一个涉及细胞形态学和分子修饰多步骤的过程。随着这种复杂的改变不断发生，细胞出现不规则增生和恶性转化。严重的有可能会导致肺部组织的病变。因此，香烟诱导NHBE细胞模型被用来作为评价药物抑制CS毒性，保护肺部组织的一个体外评价模型。采用CSE干预的NHBE 细胞模型评价了去甲基蟛蜞内酯对正常支气管上皮细胞的保护作用。发现去甲基蟛蜞内酯为2.5，5.0，10，20μmol/L时均对细胞具有保护作用，并呈浓度依赖性。初步结果表明去甲基蟛蜞内酯可能是NHBE细胞损伤的一种有效的保护剂，对肺癌的预防具有积极的作用。
应用 [1-2]
1）去甲基蟛蜞菊内酯(去甲基蟛蜞内酯)对香烟烟雾干预NHBE细胞损伤的保护作用。有研究考察去甲基蟛蜞菊内酯(去甲基蟛蜞内酯)(Demethylwedelolactone，DWEL)对肺支气管上皮细胞(Normal Human Bronchial Epithelial，NHBE)的保护作用。以香烟烟雾提取物(Cigarette Smoke Extract，CSE)干预NHBE细胞为模型，评价DWEL对模型细胞存活率的影响。进一步采用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)试剂盒评价DWEL对细胞氧化损伤的影响；采用Western blot对炎症指标环氧化酶-2(Cyclooxygenase，COX-2)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)进行测定。结果显示，DWEL能显著提高CSE干预的NHBE细胞的存活率(70.1%)，提高SOD的活力，下调MDA的含量，使COX-2和ICMA-1的表达显著降低，并向正常方向接近。表明DWEL能降低CSE干预的NHBE损伤。
2）制备一种治疗急性腹泻的西药组合物，所述治疗急性腹泻的西药组合物，按照重量份的主要原料为：咖啡酸甲酯8-12份、苦瓜苷A-15-19份、白芥子苷3-8份、地黄苷7-12份、次水杨酸铋0.5-0.7份、甲氟哌酸6-9份、去甲基川陈皮素16-22份、去甲基蟛蜞内酯7-15份、石蒜碱盐酸盐2-4份、异莪术烯醇2-4份、3-氢化去氢松苓酸2-4份、灵芝酸C6-2-4份、异银杏素5-10份。本发明药物根据急性腹泻的认识机理对原料成分进行严格挑选，从而达到全面康复的目的，具有起效快、作用稳定、携带服用方便、长期服用无毒副作用的特点。
含量测定[3-4]
方法1：HPLC法同时测定息喘丸中补骨脂素、佛手柑内酯、去甲蟛蜞菊内酯(去甲基蟛蜞内酯)、蟛蜞菊内酯4个有效成分的含量。:采用依利特C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；以甲醇-乙腈(2∶1)与0.5%冰醋酸溶液为流动相进行梯度洗脱；流速为1.1 ml·min；柱温为25℃；检测波长(0~20 min、在222 nm波长下检测补骨脂素和佛手柑内酯；20~40 min、在351 nm波长下检测去甲蟛蜞菊内酯(去甲基蟛蜞内酯)和蟛蜞菊内酯)。结果：4个有效成分的线性范围分别为：补骨脂素5.380~107.600μg·ml-1(r=0.999 5)、佛手柑内酯6.870~137.400μg·ml-1(r=0.999 7)、去甲蟛蜞菊内酯(去甲基蟛蜞内酯)4.580~91.600μg·ml (r=0.999 2)、蟛蜞菊内酯7.300~146.000μg·ml-1(r=0.999 9)；平均回收率分别为96.82%、98.81%、99.06%、98.39%，RSD分别为0.77%、1.40%、1.20%、0.80%(n=6)。该方法操作准确稳定、灵敏度高、重复性好，可用于息喘丸中上述4个有效成分的定量测定。
方法2：HPLC波长切换法同时测定肾炎灵胶囊中柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲蟛蜞菊内酯(去甲基蟛蜞内酯)和蟛蜞菊内酯。采用高效液相色谱法，Agilent Extend-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇–乙腈（1∶1）与0.5%冰醋酸溶液，梯度洗脱；检测波长：330 nm（014 min检测远柳穿鱼叶苷）、203 nm（1420 min检测地榆皂苷-Ⅰ）、224 nm（2029 min检测女贞苷和特女贞苷）、351 nm（2945 min检测去甲蟛蜞菊内酯(去甲基蟛蜞内酯)和蟛蜞菊内酯）；体积流量：0.8 m L/min；柱温：30℃；进样量为10μL。结果柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲蟛蜞菊内酯(去甲基蟛蜞内酯)和蟛蜞菊内酯分别在2.9759.40、19.59391.80、1.7835.60、4.9699.20、1.1322.60、3.2965.80μg/m L线性关系良好；平均回收率分别为97.97%、99.78%、96.98%、98.52%、98.10%、99.10%，RSD值分别为0.76%、1.01%、0.66%、1.22%、0.95%、1.56%。
主要参考资料
[1]去甲基蟛蜞内酯对香烟烟雾干预NHBE细胞损伤的保护作用
[2] CN201611172251.3一种治疗急性腹泻的中西药组合物及其制备方法
[3] HPLC法测定肾炎灵胶囊中柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲基蟛蜞内酯和蟛蜞菊内酯
[4] HPLC 波长切换技术同时测定息喘丸中补骨脂素、佛手柑内酯、去甲基蟛蜞内酯和蟛蜞菊内酯的含量。