背景及概述[1][2]
玄参为我国传统常用中药材，为玄参科植物玄参 Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，具有清热凉血、滋阴降火、解毒散结之功效。现代药理学研究表明，玄参具有抗炎、免疫调节、神经保护和抗脑缺血等活性。环烯醚萜类化合物为玄参中重要的化学成分类型，其中哈巴苷是玄参主要的环烯醚萜苷类成分之一。
大量研究表明，哈巴苷的药理活性与玄参传统功效相关，哈巴苷可促进脾淋巴细胞-刀豆蛋白A诱导的增殖反应，具有神经保护作用和抑制血小板凝聚作用。据文献报道，传统的产地加工和炮制手段可降低玄参中的 哈巴俄苷含量，升高哈巴苷含量。2015年版《中国药典》（一部）规定玄参中哈巴俄苷和哈巴苷的总含量不得少于 0.45％。
因此，进行哈巴苷的体内代谢研究有助于阐明其代谢产物及其分布、代谢途径以及代谢产物可能的活性，揭示其体内存在形式和发挥药效的机制，为归属玄参体内代谢产物来源、阐明药理作用机制和炮制机制提供依据。目前针对哈巴苷提取方法有溶剂直接提取法，水提醇沉和微波提取等方法。传统工艺采用水以及水醇混合溶液提取，再以大孔吸附树脂的方法处理，此法脱色效果差，洗脱线性不佳。
结构
作用和用途[1-2]
大量研究表明，哈巴苷的药理活性与玄参传统功效 相关，哈巴苷可促进脾淋巴细胞-刀豆蛋白A诱导的增殖 反应，具有神经保护作用和抑制血小板凝聚作用。有实验研究哈巴苷对急性脑缺血及线粒体介导的caspase依赖性细胞凋亡通路的影响。采用MCAO法建立小鼠急性脑缺血模型，造模后各组立即尾静脉注射（iv）哈巴苷(4、8、12 mg·kg-1)、依达拉奉(3.2 mg·kg-1)，模型组及假手术组同法给予等量生理盐水，0.1 mL·（10 g）-1。
造模6h后，观测小鼠神经功能评分、脑梗死体积及脑组织形态病理学变化；采用Western blot法测定各组脑组织线粒体中Cyt C及胞质中pro-caspase-3的含量。结果造模6 h后，哈巴苷各剂量组均能明显降低因缺血而增加的小鼠神经功能评分及脑梗死体积（P<0.01，P<0.05）；均能不同程度减轻脑组织神经元核固缩、核溶解程度，改善脑组织因缺血造成的病理损伤；能明显上调脑组织线粒体中Cyt C及胞质中pro-caspase-3的表达。结论哈巴苷对急性脑缺血具有保护作用，其保护作用可能与抑制线粒体介导的caspase依赖性细胞凋亡信号通路相关。
此外，哈巴苷在进入体内后通过各种代谢途径，产生了结构相似的代谢产物。经过活性预测，哈巴苷的多种代谢产物具有治 疗癫痫、ALS、糖尿病和脑中风等疾病的潜在活性。这些代谢产物的潜在活性与哈巴苷的免疫调节作用和神 经保护作用以及玄参的免疫调节、神经保护和血糖调节作用有一定的相关性。
制备 [3]
一种利用高速逆流色谱分离纯化制备安哥拉苷C、桃叶珊瑚苷和哈巴苷的方法，其包括以下步骤：
1)将玄参药材粉碎成粗粉，加入体积分数 30％的乙醇溶剂中，加热至回流提取1-3次，提取液趁热过滤，冷却，滤液减压除去溶剂，得到乙醇提取物；
2)将乙醇提取物加入填充有大孔吸附树脂的色谱柱中，用水和乙醇的混合 溶剂梯度洗脱，分别收集含有安哥拉苷C的洗脱液、含有桃叶珊瑚苷和哈巴苷的洗脱液，减压回收乙醇，干燥、分别得到安哥拉苷C粗提物、桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物；
3)将安哥拉苷C粗提物进行高速逆流色谱分离，以体积比为4：6：10的正丁醇、乙酸乙酯、水组成高 速逆流溶剂体系，将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置，按上下两相分开，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱 仪，在500～1000r/min转速下，以0.5～5ml/min的流速注入流动相，以波长190-380nm的紫 外检测器检测，当明显有流动相流出时，取安哥拉苷C粗提物，用上相、下相体积比1：1的混合溶剂溶解后进样，根据紫外检测器光谱图的峰形收集含安哥拉苷C的流出液，浓缩、干燥，制得安哥拉苷C粗品；
4)将安哥拉苷C粗品用中低压制备色谱进行纯化，用水、甲醇体积比 1：1的混合溶剂进行等度洗脱，流速35mL/min，根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰 形收集含安哥拉苷C的洗脱液、减压浓缩，冷冻干燥，制得安哥拉苷C纯品；
5)将桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物进行高速逆流色谱分离，以体积比为2：7：8：8的正丁醇、乙醇、硫酸铵饱和溶液、水组成高速逆流溶剂体系，将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置，按上下两相分开，取下相为固定相，上相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱仪，在500～1000r/min转速下，以0.5～5ml/min的流速注入流动相，以波长190-380nm的紫外检测器检测，当明显有流动相流出时，取桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物，用上相、下相体积比1：1的混合溶剂溶解后进样，定时收集流出液，用HPLC检测，合并相同成分的流出液，分别得到含桃叶珊瑚苷的流出液和含哈巴苷的流出液，浓缩、干燥，分别制得桃叶珊瑚苷粗品A、哈巴苷粗品；
6)将桃叶珊瑚苷粗品A通过中低压制备色谱分离，用水和甲醇的混合溶剂梯度洗脱，流速35mL/min，波长210nm的紫外检测器检测，定时收集洗脱液，用HPLC检测，合并相同成分的洗脱液，收集得到含桃叶珊瑚苷的洗脱液，浓缩，干燥，制得桃叶珊瑚苷粗品B；
7)桃叶珊瑚苷粗品B再通过制备液相色谱进行纯化，以甲醇、水体积比5：95的混合溶剂等度洗脱，流速3mL/min，根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰形收集含桃叶珊瑚苷的洗脱液，浓缩，干燥，制得桃叶珊瑚苷纯品；
8)取步骤(5)得到的 哈巴苷粗品，通过制备液相色谱进行纯化，以甲醇、水体积比12：88的混合溶剂等度洗脱，流速3mL/min，根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰形收集含哈巴苷的洗脱液，浓缩，干燥，制得哈巴苷纯品。
主要参考资料
[1] CN201710025386.5 一种高纯度哈巴苷的制备方法
[2] 哈巴苷在大鼠体内代谢产物的鉴定与分析
[3] CN201410520014.6一种利用高速逆流色谱分离纯化制备安哥拉苷C、桃叶珊瑚苷和哈巴苷的方法