背景及概述[1][2]
去氢茯苓酸为茯苓的提取物。茯苓的化学成分较为复杂，有多糖、三萜、脂肪酸、甾醇及酶等。多糖和三萜为其主要成分。茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf，为多孔菌科(Polyporaceae)真菌茯苓的干燥菌核，茯苓是卫生部颁布的批，按照传统既是食品又是药品的34个品种之一。茯苓为《中华人民共和国药典》收载品种。其性平，味甘、淡。归心、肺、脾、肾经,具有利水渗湿、健脾补中、宁心安神的功效。现代药理研究表明，茯苓具有较好的调节免疫功能、抗肿瘤、保肝、抗炎和抗衰老等作用。
制备[1]
步骤1：取茯苓药材采用60‑90％乙醇加热回流提取2‑4次，合并提取液，减压回收至无醇味，离心；
步骤2：取步骤1离心后的上清液，通过大孔吸附树脂吸附结束后，依次用0‑50％乙醇洗脱和70‑90％乙醇洗脱，乙醇用量按体积比计算为树脂体积的6‑12重量倍，合并70‑90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，并与离心沉淀合并，得干浸膏I；
步骤3：取浸膏I加甲醇回流提取5‑10次，每次提取0.5～2小时，至提取液近无色， 合并提取液，减压回收溶剂，减压干燥，得干浸膏II；
步骤4：取浸膏II，加50‑200体积份甲醇溶解，拌入20‑500重量份硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶；另取空白硅胶500‑8000重量份，加石油醚充分溶胀后，湿法装柱，将拌样硅胶装于柱顶，依次采用体积比为100∶1‑1∶10的石油醚‑丙酮混合溶剂洗脱，洗脱结束后，依次采用体积比为100∶0‑1∶10的氯仿‑甲醇混合溶剂梯度洗脱，分份收集；
步骤5：取上述洗脱部分氯仿洗脱流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，得到拌样硅胶，采用体积比为50∶1∶0.1‑5∶1∶0.1的氯仿‑乙酸乙酯‑冰醋酸混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每50～200ml收集一份，合并流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶；
步骤6：按拌样硅胶质量的20‑80倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比9∶1∶0.1‑10∶1∶0.1的二氯甲烷‑乙酸乙酯‑冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每50‑200ml收集一份，合并流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶；
步骤7：按拌样硅胶质量的30‑100倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比为18∶1∶0.2‑22∶1∶0.2氯仿‑乙酸乙酯‑冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每30‑100ml收集一份，合并流份，回收溶剂，浓缩，静置析出白色针状结晶，用甲醇反复重结晶，得单体化合物。
用途 [2]
茯苓萃取物及其活性成分可有效提升细胞内胶原蛋白、 细胞外胶原蛋白及细胞外透明质酸的含量，此即，茯苓萃取物及其活性成分可有效提升内源性胶原蛋白及透明质酸的含量，故可用于保养肌肤及促进伤口愈合。
CN201710789742.0提供一种使用茯苓萃取物于制备一制剂的用途，其中该制剂用于保养肌肤及／或促进伤口愈合。较佳地，该茯苓萃取物包含以下的至少一者：去氢茯苓酸（dehydropachymic acid，DPA）、茯苓酸（pachymic acid，PA）、去氢土莫酸（dehydrotumulosic acid，DTA）、土莫酸（tumulosic acid，TA）、猪苓酸C（polyporenic acid C，PAC）、3-表-去氢土莫酸（3-epi-dehydrotumulosic acid，EDTA）、去氢栓菌酸 （dehydrotrametenolic acid，DTTA）、栓菌酸（trametenolic acid，TTA）、去氢层孔菌酸 （dehydroeburicoic acid，DEA）、层孔菌酸（eburicoic acid，EA）、茯苓新酸A（poricoic acid A，PAA）及茯苓新酸B（poricoic acid B，PAB）。更佳地，该茯苓萃取物为茯苓皮部萃取 物，其中以茯苓皮部萃取物的总重量计，茯苓新酸A及茯苓新酸B的总含量不小于40重量%。
A.茯苓萃取物的制备
A-1.取茯苓药材（来源产地为云南），清洗后剥取其外皮（下称“茯苓皮部”），其余即为 肉部（下称“茯苓肉部”）。
取 A-1 所获得的茯苓皮部，于室温下，以1：8（茯苓药材：乙醇水溶液）的体积比浸 泡于75%乙醇水溶液中，历时12小时，然后煮沸并进行萃取（历时3小时）。重复前述萃取步骤，共三次。合并三次萃取所得的萃取液并过滤以去除不溶物，以获得一粗萃取物。接着，对前述的粗萃取物进行减压浓缩以去除溶剂，再以喷雾干燥机进行干燥，以获得一粗萃物粉 末。
取 A-2 所获得的粗萃物粉末，以1：8（粗萃物粉末：乙醇水溶液）的体积比与95%乙 醇混合，并进行萃取（历时3小时），接着，再利用以硅胶为固定相的管柱进行分离，获得一茯苓皮部萃取物。
以液相层析／紫外光／质谱仪，分别于243纳米及210纳米波长下检测 A-3 所获得 的茯苓皮部萃取物的成分，并以高效液相色谱法定量该萃取物中各成分的含量，分析结果示于表1。
A-5.合并 A-1 所获得的茯苓皮部及茯苓肉部，重复上述 A-2 及 A-3的萃取步骤，以 获得一茯苓萃取物。接着，以 A-4 的分析方法检测所获得的茯苓萃取物的成分。结果显示， 该茯苓萃取物含有去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢土莫酸、土莫酸、猪苓酸C、3-表-去氢土莫酸、 去氢栓菌酸、栓菌酸、去氢层孔菌酸、层孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B等成分。
茯苓萃取物的活性成分的制备
B-1.以1：500（萃取物：甲醇）的体积比，将 A-5 所获得的茯苓萃取物均匀溶解于甲醇 中。过滤去除不溶物后，以制备级高效能液相层析仪（以甲醇与水混合作为移动相），分别于 243纳米及210纳米波长下，针对去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢土莫酸、土莫酸、猪苓酸C、3-表- 去氢土莫酸、去氢栓菌酸、栓菌酸、去氢层孔菌酸、层孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B进行分 离及收集，收集后再以减压浓缩机去除甲醇，分别得到去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢土莫酸、土 莫酸、猪苓酸C、3-表-去氢土莫酸、去氢栓菌酸、栓菌酸、去氢层孔菌酸、层孔菌酸、茯苓新酸 A及茯苓新酸B。
以液相层析／紫外光／质谱仪，分别于243纳米及210纳米波长下检测B-1所获得的 去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢土莫酸、土莫酸、猪苓酸C、3-表-去氢土莫酸、去氢栓菌酸、栓菌 酸、去氢层孔菌酸、层孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B，结果显示这些成分的纯度都大于 98%。
主要参考资料
[1] CN201110057347.6 新去氢茯苓酸【公开】/去氢茯苓酸【授权】
[2] CN201710789742.0 茯苓萃取物及其活性成分于保养肌肤及／或促进伤口愈合的用途