溶剂红 27又称油红O，该染料对脂肪变性、脂质沉积的组织器官有良好的溶脂及吸附作用,它具有操作简便、色彩鲜亮等特点,优于苏丹III染液,被广泛运用于临床和科研病理工作中。针式滤膜过滤器原用于过滤色谱分析样品及流动相,对色谱柱的保护、防止进样阀和输液泵管系统被污染等具有较好的作用,广泛应用于无菌实验、胶体分离及质量与微量分析。溶剂红 27染液中含醇类物质易挥发且杂质多,因此传统染色需要异丙醇漂洗分色,整个步骤历时较长且不易控制,对人体也有吸人性危害。本文现介绍一种新型、高效的针式滤膜过滤器溶剂红 27染色方法,与传统方法相比具有快速高效、经济环保的优势。
方法
1、传统溶剂红 27染色方法
(1)常规冷冻切片将高脂小鼠肝脏样本切片6~8 um厚,贴于载玻片,立即置于10%中性福尔马林固定3min,双蒸水清洗;(2)取溶剂红 27储备液与双蒸水为3:2混合后,装入洁净EP管静置10min;(3)将切片放入60%异丙醇清洗后置于配制好的溶剂红 27染液10min;(4)用60%异丙醇清洗多余染液，双蒸水清洗3次;(5)苏木精复染1min,1%盐酸乙醇分化,流水返蓝3min;(6)甘油明胶封固。
2、针式滤膜过滤器溶剂红 27染色法
(1)常规冷冻切片将高脂小鼠肝脏样本切片6~8 pm厚,贴于载玻片,立即置于10%中性福尔马林固定3min,双蒸水清洗;(2)取溶剂红 27储备液与双蒸水为1:1混合,装入洁净EP管内备用(图1);(3)将切片从水中取出沥水后平铺于湿盒内,注意不要干片;(4)用注射器吸取配制好的溶剂红 27染液,由针式滤膜过滤器(0.22m)上端接口处注入,过滤后的染液直接经过滤器下端均匀滴染在组织处(图2),约30s后放人双蒸水中清洗1次;(5)苏木精复染1min,1%盐酸乙醇分化,流水返蓝3min;(6)甘油明胶封固。
结果
肝脏组织形成脂肪样变时,细胞质内脂肪聚集为脂肪小体,进而融合成脂滴,以大小不等的空泡状、部分细胞核偏向细胞的一侧形式存在。溶剂红 27染料的脂溶作用和吸附作用将脂滴染成鲜红色,细胞核呈蓝色。传统溶剂红 27染色法静置使染液中的杂质颗粒沉淀、切片经60%异丙醇清洗、分色等环节[增加制片的时间,且染色用时较长(从切片到染色整个过程约30min)(图3);而运用针式滤膜过滤器溶剂红 27染色法，不但避免沉淀、清洗、分色环节,还缩短了染色时间(从切片到染色整个过程约10 min),最终能达到相同效果，从而大大降低时间成本,提高染色效率(图4)。
参考文献
[1]陈菲,李丽,牛钰清,等. 介绍一种新型高效的油红O染色法[J]. 临床与实验病理学杂志,2018,34(7):808-809. DOI:10.13315/j.cnki.cjcep.2018.07.028.