背景[1-3]
猪补体蛋白3(C3)Elisa试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠补体蛋白3(C3)水平。用纯化的猪补体蛋白3(C3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入补体蛋白3(C3)，再与HRP标记的补体蛋白3(C3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的补体蛋白3(C3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠补体蛋白3(C3)浓度。
猪补体蛋白3(C3)Elisa试剂盒
猪补体蛋白3(C3)Elisa试剂盒样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
猪补体蛋白3(C3)Elisa试剂盒操作程序：
1.预先计算好所需的板条数，实验前30 min，拿出试剂盒，恢复至室温。
2.每个反应孔中加入100μl标准品工作液或检测样本（若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样），标准品需做复孔，封板后于37°C孵箱孵育90 min。
3.弃去液体，甩干，每个反应孔中加入100μl生物素标记瘦素抗体工作液至反应孔中，封板后于37°C孵箱孵育60 min。
4.洗涤：弃去液体，甩干，每个反应孔中加入350μl洗涤液，浸泡1-2 min，甩干洗涤液。重复4次。
5.每个反应孔中加入100μl HRP标记链霉亲和素工作液至反应孔中，封板后于37°C孵箱孵育30min。
6.洗涤：每个反应孔中加入300μl洗涤液，间隔30 s，甩干洗涤液。重复4次。
7.每个反应孔中加入90μl显色剂（避光）至反应孔中，封板后于37°C避光显色15 min左右。
8.每个反应孔中加入50μl终止液，即刻用酶标仪450 nm波长下测量OD值（5 min内）。
9.用酶标仪450 nm波长测定OD值。
10.计算标准品、样品的平均OD值：每个标准品和样本的OD值应减去零孔的OD值。
11.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用“四参数logistics模型”绘制标准曲线。
12.若样本OD值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。
应用[4][5]
猪补体蛋白3(C3)Elisa试剂盒可以用于血清IgA/C3值对IgA肾病的诊断价值
探讨血清Ig A/C3水平对Ig A肾病（Ig AN）的诊断价值。
方法：选取首次行肾活检且诊断结果为原发性Ig AN和原发非Ig AN肾小球疾病患者,比较其临床资料的差异性,绘制受试者工作特征（ROC）曲线通过猪补体蛋白3(C3)Elisa试剂盒比较血清免疫球蛋白A（Ig A）、补体蛋白3（C3）及Ig A/C3值对Ig A肾病的诊断效能,并根据最佳截断值将Ig AN分为两组,比较组间实验室指标差异。结果Ig AN组血清Ig A水平及Ig A/C3值较对照组高,血清C3水平低,差异有统计学意义（P均<0.05）。Ig A/C3值预测Ig AN的ROC曲线下面积为0.843,灵敏度为72.0%,特异度为84.6%,最佳截断值为2.57。Ig A/C3高组尿红细胞、球蛋白、免疫球蛋白G（Ig G）、Ig A高于Ig A/C3低组,补体C3与C4、血红蛋白、甘油三酯及24 h尿蛋白定量水平低于Ig A/C3低组,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论血清Ig A/C3值对Ig AN诊断有一定价值。
参考文献
[1]Is There a Role for IgA/C3 Ratio in IgA Nephropathy Prognosis?An Outcome Analysis on An European Population.[J].Stefan Gabriel;Stancu Simona;Boitan Bianca;Zugravu Adrian;Petre Nicoleta;Mircescu Gabriel.Iranian journal of kidney diseases.2020
[2]Persistent Hematuria and Kidney Disease Progression in IgA Nephropathy:A Cohort Study[J].Gui-zhen Yu;;Ling Guo;;Jin-feng Dong;;Su-fang Shi;;Li-jun Liu;;Jin-wei Wang;;Gui-li Sui;;Xu-jie Zhou;;Ying Xing;;Hai-xia Li;;Ji-cheng Lv;;Hong Zhang.American Journal of Kidney Diseases.2020
[3]High serum IgA/C3 ratio better predicts a diagnosis of IgA nephropathy among primary glomerular nephropathy patients with proteinuria≤1 g/d:an observational cross-sectional study.[J].Gong Wen-Yu;;Liu Man;;Luo Dan;;Liu Fan-Na;;Yin Liang-Hong;;Li Yuan-Qing;;Zhang Jun;;Peng Hui.BMC nephrology.2019
[4]Glomerular disease frequencies by race,sex and region:results from the International Kidney Biopsy Survey.[J].O'Shaughnessy Michelle M;;Hogan Susan L;;Thompson Bawana D;;Coppo Rosanna;;Fogo Agnes B;;Jennette J Charles.Nephrology,dialysis,transplantation:official publication of the European Dialysis and Transplant Association-European Renal Association.2018
[5]王雪,刘亚,孟巧云,等.血清IgA/C3值对IgA肾病的诊断价值[J].山东医药,2021,61(34):83-86.