免疫组化技术是一项基于对过氧化物酶检测的技术,其机制为利用过氧化物酶催化DAB(3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐)产生不溶于水的棕色物质,达到显色的目的。再通过显微镜观察或图像分析系统分析该棕色物质的光密度值，定量判断被检测成分的含量。3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐属于联苯胺类化合物,联苯胺类化合物能通过多种途径进入人体,对人体也具有多方面的毒性作用,包括免疫毒性、生殖毒性、遗传毒性以及致癌作用。此外,3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐对环境的危害也是相当大的。而在做免疫组化时,为了达到比较准确的实验效果,3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐的用量通常是过量的。这样对3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐的处理将变的十分必要。
结构与性质
3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐简称DAB，又名(1,1'-联苯)-3,3'4,4'-四胺四盐酸盐，属于联苯胺类物质。纯品为略带有粉色的浅棕褐色粉末，纯度可>99.0%。可溶于水，溶解度可达50mg/ml。熔点:300℃,分子量:360.11,分子式:C12H14N4·4HCl。
处理方法
(1)向盛有剩余3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐液体的专用烧杯中加入一定量浓度为30%的H2O2溶液与一定量浓度为20mmol/L的Fe2+溶液,搅拌均匀,H2O2溶液与Fe2+溶液的体积比为1:1(Fenton试剂)。根据我们的经验,处理免疫组化操作中产生的剩余3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐溶液,所用的Fenton试剂体积与剩余3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐溶液体积比约为1:1时能到达较好的效果。(2)将烧杯放入微波炉中,中火微波15min左右。注意控制水温,不可让水温达到沸腾的温度(可通过间断加热的方式),一般保证微波总处理时间15min左右。如此,能完成剩余3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐的初级处理。(3)待水温冷却后回收混合液体待进一步处理[1]。
参考文献
[1]刘杰,罗波,石玉香. 免疫组化染色中剩余DAB的处理方法[J]. 临床与实验病理学杂志,2011,27(4):439-440. DOI:10.3969/j.issn.1001-7399.2011.04.030.