背景[1-3]
乙型流感病毒(IBV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒,可以对靶片段进行实时定量PCR分析(quantitative PCR、qPCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有实时定量PCR所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应和HRM分析,具有广泛的用途。
乙型流感病毒(IBV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)
储存条件及有效期:
避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期为12个月。
适用仪器:
ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
乙型流感病毒(IBV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)产品特点：
1.方便,用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验和HRM(High Resolution DNA Melt Curve Analysis)分析。而基于SYBR Green I 和LC Green染料的qPCR mix则不能同时用于上述两种实验。
2.使用第三代饱和型荧光染料,信号强,不会抑制PCR反应。
3.快捷,即用型的预配液使加样操作步骤大大简化,避免了交叉污染,降低实验误差。
4.各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。
乙型流感病毒(IBV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)操作步骤：
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1.2DNA提取
2.试剂配制（试剂准备区）
3.加样（样本处理区）
4.PCR扩增（核酸扩增区）
5.结果分析判定
乙型流感病毒(IBV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)参考值（参考范围）
1.试剂盒有效性判定：
（1）阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
（2）阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。
2.标本结果判定：
（1）阳性：标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
（2）可疑：标本检测结果Ct值在35～38范围内。此时应对标本进行重复检测，如重复实验结果Ct值仍在35～38范围内，有明显指数增长期，则判定为阳性，否则为阴性。
（3）阴性：标本检测结果Ct值＞38或无Ct值。
应用[4][5]
乙型流感病毒(IBV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)可以用于镇江市流感病毒时空分布特征及其流行株HA和NA基因变异规律的研究
流行性感冒,简称流感,是由流感病毒(Influenza Virus,IV)引起的急性呼吸道传染病,可造成世界范围内的广泛流行。本研究从流行病学、分子生物学、血清学等方面出发,旨在掌握镇江市流感流行趋势,为该市预测疫苗防治效果及防控流感流行提供科学依据。
方法:1.收集2014-2016年镇江市哨点医院采集的流感样病例样本,利用乙型流感病毒(IBV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)进行病毒分型,从《中国流感监测信息系统》中导出相应的监测数据,结合实验室结果进行流行病学统计分析。2.对流感病毒核酸阳性样本开展病毒分离以获得流行株,分别扩增其HA和NA基因后测序,利用分子生物学软件对序列进行拼接、比对和分析,与WHO推荐的北半球疫苗株以及省内外代表株等比对溯源。3.对不同年龄组健康体检人群进行甲型H1N1、甲H3、乙型(BY/BV)流感抗体水平检测和分析。结果:1.2014-2016年镇江市流感的流行具有季节性,冬春季是其发病高峰,夏季也会出现小的流行。三年流行株以甲型H1N1、甲H3、乙型(BY/BV)混合交替流行为主。流感病毒对性别的敏感性无差异,但是60岁及以上、5岁~人群感染阳性率仍最高。七个辖市区均有流感病毒的检出。2.十三株甲型H1N1分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA和NA核苷酸同源性均在95.6%以上。七株HA与江苏株A/Jiangsu-Danyang/SWL1836/2014的亲缘性最近,一株与疫苗株高度同源。九株NA与疫苗株聚集在一起。与疫苗株HA氨基酸位点进行比对,Sa区十一株发生了K173Q突变,一株同时发生K181E突变;Ca1区三株发生V183I突变,但是受体结合位点、糖基化位点均未发现变异,抗原性没有发生改变。
参考文献
[1]Vaccine options for influenza:thinking small[J].Bert Schepens;;Dorien De Vlieger;;Xavier Saelens.Current Opinion in Immunology.2018
[2]Safety and Immunogenicity of a Recombinant Influenza Vaccine:A Randomized Trial[J].Lisa M.Dunkle;;Ruvim Izikson;;Peter A.Patriarca;;Karen L.Goldenthal;;Manon Cox;;John J.Treanor.PEDIATRICS,2018(5)
[3]Epidemiological survey of equine influenza in Andalusia,Spain[J].E.Jurado-Tarifa;;J.M.Daly;;A.Pérez-Écija;;M.Barba-Recreo;;F.J.Mendoza;;A.M.Al-Shuwaikh;;I.García-Bocanegra.Preventive Veterinary Medicine.2018
[4]Inter-individual variation in health and disease associated with pulmonary infectious agents.[J].Verhein Kirsten C;;Vellers Heather L;;Kleeberger Steven R.Mammalian genome:official journal of the International Mammalian Genome Society.2018
[5]杨静.镇江市流感病毒时空分布特征及其流行株HA和NA基因变异规律的研究[D].江苏大学,2018.