小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的IL-6的ELISA试剂盒。小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒的检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒最小检出量为12.8pg/ml，与大鼠IL-6、人IL-6均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%，在生物化学基础研究领域中有重要的应用。
简介
小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒的免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的小鼠IL-6。小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒包含大肠杆菌表达重组小鼠IL-6和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然小鼠IL-6获得的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒可用于测定天然小鼠IL-6的相对质量值。
背景概述
小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA是一种多功能、呈α螺旋、易于磷酸化和糖基化的细胞因子，分子量为22-28KD。IL-6在免疫反应、炎症、血细胞生成、骨代谢、细胞增殖、生长、存活和分化、以及肿瘤等疾病的发生发展过程中有重要作用。小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒就是针对检查小鼠白细胞介素6的商业试剂盒。IL-6的受体是细胞表面的IL-6Rα和gp130亚基组成的异二聚体。IL-6与IL-6Rα结合后引发IL-6Rα与gp130的二聚化，从而激活下游的信号通路，主要包括JAK/STAT信号通路、Ras信号通路以及PI3K信号通路。IL-6Rα和gp130组成了IL-6的受体复合物，而gp130也是CLC、CNTF、CT-1、IL-11、IL-27、LIF、OSM等的受体复合物的组分。[1]
作用原理
图1 小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒的作用原理
小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中靶蛋白的的浓度。在小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒中靶蛋白特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的靶蛋白会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗靶蛋白抗体后，生物素化抗靶蛋白抗体与靶蛋白结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记，由于生物素与链霉亲和素可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值，小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒就能实现定量检测。靶蛋白浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。
使用说明
小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒混合蛋白质溶液时，应始终避免起泡。为了避免交叉污染，在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。此外，每种试剂应单独使用容器。确保试剂不间断地添加到板孔中。为了确保准确的结果，在孵育步骤中需要粘合好封板膜。当使用自动洗板机时，在小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期，或者在洗涤步骤之间将板旋转180度，可以提高测定精度。显色剂应保持无色，直到添加到板中。确保显色剂不受光线照射。显色剂应从无色变为蓝色。应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后，孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。绿色的孔表示终止液未与基质溶液充分混合。
参考文献
[1] Drew A. Sukovich, Expression of Interleukin-6 in Atherosclerotic Lesions of Male ApoE-Knockout Mice : Inhibition by 17β-Estradiol, Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular BiologyVolume 1998, 18, 1498-1505.