介绍
大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆中的内源性促甲状腺素释放激素（TRH）浓度。
大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒
检测原理
大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒采用竞争抑制酶免疫法，试剂盒中的 96 孔酶标板已预包被羊抗兔抗体（固相二抗）；向对应孔中加入标准品 / 样本、TRH 特异性抗体及辣根过氧化物酶（HRP）标记的 TRH，HRP 标记 TRH 与样本中未标记 TRH 竞争结合特异性抗体，形成包被二抗 - 抗 TRH 抗体 - TRH（或 HRP-TRH）复合物；加入底物溶液后，显色强度与样本中 TRH 含量呈负相关，终止反应后测定吸光度（OD 值），通过标准曲线即可反算 TRH 浓度。
检测流程
大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒使用时，所有试剂（含标准品、样本）室温（18-25℃）平衡至少 30 分钟，试剂管开启前建议离心数分钟，使管壁液体集中至管底。若 20 倍浓缩液有结晶，室温溶解后，取 15 mL 浓缩液加去离子水至 300 mL，临用前配制（用刻度容器混匀）。接着，确定所需孔数，大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒中剩余孔与干燥剂密封后 4℃保存；设 1 个空白孔，标准品及样本均做复孔。每孔加 50 μl 标准品或样本，随后每孔加 50 μl HRP 偶联物，空白孔不加，再加 50 μl TRH抗体，轻柔混匀，封板后 37℃孵育 1 小时。吸弃孔内液体，每孔加 200 μl 1× 洗涤缓冲液，静置 10 秒后弃液，重复 3 次；最后倒置酶标板，在吸水纸上拍干。每孔加 50 μl 底物 A 和 50 μl 底物 B，混匀后 37℃避光孵育 15 分钟，可每隔 10 分钟观察显色，若颜色过深可提前加终止液。每孔加 50 μl 终止液，轻柔混匀，10 分钟内用酶标仪测 450 nm 吸光度[1]。
参考文献
[1]Wang J, Liu S, Xie Y, Xu C. Association analysis of gut microbiota-metabolites-neuroendocrine changes in male rats acute exposure to simulated altitude of 5500 m[J]. Scientific Reports, 2023, 13: 9225.