吖啶橙是一种常用的荧光染料，兼具碱性染料特性与荧光探针功能，应用场景广泛。吖啶橙通常为橙红色结晶性粉末，易溶于水和乙醇，水溶液呈橙色并带有荧光。吖啶橙主要用于细胞染色、核酸定位，可鉴别死细胞与活细胞，辅助肿瘤细胞检测、微生物计数等。也可用于水体中微生物的荧光检测，快速筛查水体污染情况。还作为荧光探针用于核酸电泳染色、荧光显微镜观察等实验。
应用
1、丁雅勤等人建立一种测定硫酸软骨素含量的分光光度分析新方法。方法在pH4.0的Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中,吖啶橙与硫酸软骨素发生相互作用生成生物超分子复合物，吖啶橙在492 nm处有一特征吸收峰,加入硫酸软骨素后,最大吸收波长不变,但吸收峰强度降低。结果在最佳条件下,溶液吸收度值的降低与硫酸软骨素浓度成线性关系,线性范围为0.04～3.00mg/L,表观摩尔吸光系数(ε)=6 600L/(mol·cm),工作曲线为△A=0.0001+0.0655C(mg/L)(n=8,r=0.998)。此法简单、准确、灵敏、选择性好，优化了结合反应的条件,建立了分光光度法测定硫酸软骨素的方法[1]。
2、万新军等人研究了吖啶橙与DNA作用的共振散射光谱,发现在pH11的碱性溶液中痕量核酸对吖啶橙的共振散射光产生增强作用,且增强程度与核酸浓度之间有良好的线性关系。据此建立了测定核酸的高灵敏共振光增强分析方法.其最大散射波长均位于324nm处,测定鱼精DNA(fs DNA)的线性范围是3.1×10-8～7.3×10-6g·mL-1,检测限20.5ng·mL-1,测定小牛胸腺DNA(ct DNA)的线性范围是7.5×10-8～9.8×10-6g·mL-1,检测限20.8ng·mL-1。该方法简单,操作方便,选择性好,灵敏度高,用于合成样品的测定结果满意[2]。
3、梁爱惠等人在pH=10.5的NH4Cl-NH3缓冲溶液中,吖啶橙在275与490nm波长处有2个吸收峰，当加入ClO2后,2个吸收峰均降低,在490nm波长处的吸光度降低值与ClO2浓度在0.080～5.0μg/mL范围成良好线性关系,ClO2检出限(3σ)为0.04μg/mL。据此建立了一种灵敏、简便、快速、准确、选择性测定痕量ClO2含量的分光光度法,用于水样分析,结果满意[3]。
参考文献
[1] 丁雅勤,孙伟,高瑞芳,等. 吖啶橙分光光度法测定硫酸软骨素含量[J]. 中国生化药物杂志,2006,27(2):68-70. DOI:10.3969/j.issn.1005-1678.2006.02.002.
[2] 万新军,刘金水,王伦. 吖啶橙共振光散射法测定脱氧核糖核酸[J]. 光谱学与光谱分析,2005,25(5):754-756. DOI:10.3321/j.issn:1000-0593.2005.05.031.
[3] 梁爱惠,蒋治良. 吖啶橙分光光度法测定水中痕量二氧化氯[J]. 桂林工学院学报,2007,27(1):125-127. DOI:10.3969/j.issn.1674-9057.2007.01.028.