简介
棕榈酰四肽-7 (Palmitoyl Tetrapeptide-7) 又称为棕榈酰四肽-3, 其氨基酸序列为Pal-Gly-Gln-ProArg, 缩写为Pal-GQPR, 属于信号类胜肽中棕榈酰寡肽系列多肽中的一种。它属于信号类胜肽, 能够促进基质蛋白 (matrix protein) 尤其是胶原蛋白的合成, 同时还可能促进弹性蛋白、透明质酸、糖胺聚糖和纤维连接蛋白等多种蛋白的生成。棕榈酰肽通过增加基质细胞的活动来促进胶原蛋白的合成, 增加皮肤弹性和更显年轻。类似传统的抗皱原料, 如维生素C、维生素A的衍生物, 但促进胶原蛋白生成的能力远胜于维生素C和维生素A视黄醇。
图一 棕榈酰四肽-7
合成
选用Fmoc作为氨基酸的氨基保护基, 将目的肽的第一个氨基的羧基固体载体二氯树脂 (2-CTC Resin) 相连, 以形成产物Fmoc-Arg (pbf) -2-CTC Resin为多肽合成的起点, 在载体树脂上使要合成的多肽进行逐个延伸缩合接肽反应, 最终合成肽链, 将其酸解脱去树脂可得到目标产物的粗品, 然后再对粗品进行鉴定和纯化可得到最终产品棕榈酰四肽-7。
棕榈酰四肽-7合成的具体步骤如下：
(1) 树脂活化。将10 g 2-CTC-Resin树脂 (Lot No:GRAS1014-1, Cross-linking:1%DVB, Particle Size:100~200 mesh, Substitution 1.75 mmol/g) 加入反应器中, 加入80 m L DCM, 室温搅拌浸泡10 min使其充分溶胀活化。
(2) 合成Fmoc-Arg (pbf) -2-CTC Resin肽树脂。在步骤 (1) 的树脂中加入12.49 g Fmoc-Arg (pbf) -OH、12 m L DIEA、100 m L DCM, 室温搅拌反应2 h, 其中2-CTC Resin、Fmoc-Arg (pbf) -OH、DIEA的摩尔比为1∶1.1∶4, 用90 m L异丙醇和90 m L DMF各进行洗涤两次, 得到保护肽树脂。
(3) 将步骤 (2) 树脂肽中加入100 m L 20%哌啶的DMF溶液, 室温搅拌反应20 min。抽滤去除溶液, 再次加入100 m L 20%哌啶的DMF溶液, 室温搅拌反应10 min, 除掉2-CTC Resin上的9-芴甲氧羰基基团。用100 m L异丙醇和100 m L DMF各洗涤两次。
(4) 合成Pro-Arg (pbf) -2-CTC Resin肽树脂。在步骤 (3) 的树脂中加入Fmoc-Pro-OH (11.8 g) 、HOBT (7.09 g) 、DIC (8.2 m L) 、DMF (90 m L) , 室温搅拌反应2 h, 其中2-CTC-Resin、Fmoc-Pro-OH、HOBT、DIC的摩尔比为1∶2∶3∶3, 用90 m L异丙醇和100 m L DMF各进行洗涤两次, 得到保护肽树脂。
(5) 合成Gly-Gln (trt) -Pro-Arg (pbf) -2-CTC Resin肽树脂。重复步骤 (3) 和 (4) , 依次连接FmocGln (trt) -OH、Fmoc-Gly-OH, 得到Gly-Gln (trt) -ProArg (pbf) -2-CTC Resin肽树脂。
(6) 合成Pal-Gly-Gln (trt) -Pro-Arg (pbf) -2-CTC Resin肽树脂。将步骤 (4) 中的树脂中加入10.7 m L棕榈酰氯、7.24 m L DIEA、120 m L DCM, 室温搅拌反应20 min。其中2-CTC Resin、棕榈酰氯、DIEA的摩尔比为1∶2∶2.5, 用120 m L异丙醇和120 m L DMF各洗涤两次, 甲醇洗涤三次, 干燥得24 g树脂肽。
(7) 制备棕榈酰四肽-7配制肽树脂切割液。将三异丙基硅烷、三氟乙酸、苯甲硫醚、水按体积比为5∶4∶88∶3加入到烧杯内搅拌混合。
(8) 切割肽树脂。在步骤 (6) 肽树脂中加入200 mL切割液, 室温搅拌反应2 h, 过滤, 滤液在38℃浓缩至油状物, 倾倒到冷冻的400 m L无水乙醚中, 滴加1.5 m L浓盐酸, 大量白色固体析出, 搅拌, 离心、分离出上清液, 室温减压烘干, 得棕榈酰四肽-7粗品, 经反相色谱法纯化、浓缩、冻干得到棕榈酰四肽-7纯品11.75 g, 纯度>95%[1]。
图二 棕榈酰四肽-7的HPLC分析图谱
参考文献
[1]李乾,张忠旗,郭添,等.棕榈酰四肽-7的固相合成[J].生物化工,2018,4(01):58-60.