简介
双环己酮草酰二腙为白色晶状粉末，溶于乙醇、碱性水溶液，对Cu²⁺具有特异性螯合能力。其核心价值在于“双环己酮草酰二腙-Cu²⁺”显色体系：在弱碱性介质中，双环己酮草酰二腙与Cu²⁺瞬间形成稳定的蓝色络合物Cu(双环己酮草酰二腙)²⁺，600nm处摩尔吸光度高，色度与铜浓度呈线性关系，裸眼可辨。实验优化表明，当1mol/LH₂SO₄4μL触发CuO纳米粒释铜，并以0.2mol/L、pH9的Tris-HCl120μL维持碱度时，显色灵敏度最高。利用该原理，研究者将CuO标记于CEA抗体，构建夹心免疫传感器[1]。
双环己酮草酰二腙的性状
双环己酮草酰二腙比色法
Cu²⁺与双环己酮草酰二胺（BCO）在弱碱性条件下可生成蓝色络合物Cu(BCO)²⁺，在600nm左右有明显的吸收峰。研究人员在抗原与抗体特异性结合反应的基础上，将CuO纳米粒子与CEA抗体结合，溶液中存在CEA时，抗体可与其形成夹心免疫结构，当加入一定量的酸后CuO可分解出Cu²⁺与溶液中的BCO发生络合反应，使溶液由无色变为蓝色，蓝色的深浅由CEA的浓度决定。裸眼观测溶液的颜色便可以初步确定CEA的大致浓度范围，进一步的定量分析则需通过溶液的吸光度值实现[1]。
BCO-Cu²⁺显色体系的最佳条件
Cu²⁺与BCO的结合是在碱性条件下进行的，因此CuO分解时H₂SO₄的用量以及缓冲液的用量也会影响最终比色结果。分别加入不同体积（2、4、6、8、12、20μL）相同浓度（1mol/L）的H₂SO₄进行考察。结果表明，吸光度值随着H₂SO₄用量的改变而发生改变，且显色体系在H₂SO₄用量为4μL时效果最优，因此选择H₂SO₄的最佳用量为4μL。通过加入相同浓度（0.2mol/L，pH9）不同用量（50、80、120、200、250、320μL）的Tris-HCl溶液观察其产生的影响。结果表明，吸光度值随着Tris-HCl用量的改变而改变，且在用量为120μL时达到最优显色效果，因此选择120μL为Tris-HCl的最佳用量[1]。
用途
双环己酮草酰二腙（BCO）主要用作显色配体：与Cu²⁺形成蓝色络合物，把CuO纳米标记物释放的Cu²⁺信号转化为肉眼可见的颜色变化，从而实现对肿瘤标志物CEA的比色免疫检测。例如：通常研究着以CuO作为纳米标记物，并利用Cu²⁺与双环己酮草酰二胺的颜色反应作为信号转导策略，成功构建了可实现CEA特异性检测的比色免疫传感器。该比色传感器在检测CEA过程中表现出较好的特异性、抗干扰性、重复性和稳定性。同时该免疫传感器在真实血清样品的分析检测中表现出良好性能，未来有望用于肿瘤的临床分析与检测[1]。
参考文献
[1] 原源,张冰,文艳斐,等. 基于Cu2+和双环己酮草酰二腙的比色免疫分析用于测定癌胚抗原 [J]. 分析试验室, 2023, 42 (02): 222-227. DOI:10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2021.121504.