简介
ZADH2抗体为兔源多克隆类型，商品化货号公开，可识别人、鼠、大鼠三种物种的ZADH2全长蛋白；推荐稀释倍数1:1000，适用于Western blot检测，也可扩展至免疫组化及免疫荧光。其抗原表位位于蛋白C端亲水区域，变性条件下仍保持结合活性，因此在SDS-PAGE后转膜体系中信号清晰、背景低。保存需-20 ℃避光分装，避免反复冻融；工作液建议现配现用，采用5% BSA-TBST稀释，室温孵育1 h或4 ℃过夜均可获得稳定条带[1]。
ZADH2抗体的性状
用途
在肝癌模型研究中，ZADH2抗体被用于验证miRNA对靶蛋白的负向调控：miRNA-3679抑制后，ZADH2条带灰度显著升高；同步siRNA敲低则信号回落，三重复实验变异系数小于8%，表明抗体灵敏度高、特异性好。与GAPDH内参对比，ZADH2抗体可稳定检出约40 kDa单一条带，无交叉杂带，适合半定量分析。若需进一步确认，可通过过表达质粒或CRISPR敲除样本设置阳性与空白对照，以“条带出现-消失”策略排除非特异信号。
ZADH2抗体提供的蛋白水平证据与qPCR、荧光素酶报告基因结果一致，共同说明miRNA-3679通过直接结合ZADH2 3'-UTR抑制其翻译；当miRNA被抑制后，ZADH2蛋白上调，细胞增殖指标下降、凋亡率升高，抗体检测成为连接分子机制与功能表型的关键桥梁。灰度比值分析显示，ZADH2表达变化幅度与EdU阳性率、克隆数及Annexin V比例呈显著负相关，提示该抗体信号可准确反映肿瘤恶性程度的逆转，为后续动物实验及临床样本验证奠定了可靠工具基础[1]。
使用注意事项
使用ZADH2抗体时，建议总蛋白上样量控制在10-20 μg，过量易导致条带拖尾；转膜后需用5%脱脂牛奶室温封闭1 h，以减低背景。一抗孵育后充分TBST洗膜（3×10 min），二抗选择HRP标记山羊抗兔IgG，稀释度1:5000，室温45 min即可显影。若样本为组织裂解液，建议加入蛋白酶抑制剂并超声破碎，防止ZADH2降解；对于磷酸化或氧化修饰研究，可平行使用抗修饰抗体与ZADH2抗体进行共染，以评估翻译后修饰对其功能的影响[1]。
参考文献
[1] 何静宇, 周雪琴, 王文涛. miRNA-3679抑制下游ZADH2-靶基因促进肝癌细胞增殖的机制研究[J]. 四川大学学报(医学版), 2022, 53(5): 744?751. DOI:10.12176/2022.53.744.