中药巴戟天为茜草科巴戟天属植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根。性甘、辛,微温。具有补肝肾、强筋骨,祛风湿的功效,用于治疔阳痿遗精,宫冷不孕,月经不调，少腹冷痛,风湿痹痛,筋骨痿软等症。据文献报道,巴戟天中的环烯醚萜苷类成分水晶兰苷(monotropein)具有较强的抗炎、镇痛作用,从药效学角度阐明了水晶兰苷为巴戟天祛风湿的物质基础成分。然而到目前为止,对巴戟天中水晶兰苷的研究只有分离和鉴定的报道,且提取得率较低。
检测方法
1、标准品溶液制备：取水晶兰苷适量,精密称定,用甲醇溶解,配制成浓度为1.3mg/mL的溶液。
2、色谱条件色谱住：Kromalsil C18柱(150mmx4.6mm,5um),流动相:甲醇-0.4%磷酸水溶液(90:10);流速:1mL/min;进样量:5uL;检测波长:233nm。在此条件下测得水晶兰苷标准品色谱图见下图。
3、标准曲线：取标准品溶液适量,分别稀释2、4、8、16倍,所得的标准品溶液在上述色谱条件下进样,分别测定峰面积。以水晶兰苷进样量含量X(ug)为横坐标,对峰面积积分值(Y)进行线性拟合,得到水晶兰苷的回归方程为:Y=22.8590X-1.2214,r=0.9996。表明水晶兰苷在0.10~6.25ug范围内呈良好线性关系。
4、精密度试验：取标准品溶液,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积积分值,水晶兰苷峰面积的RSD为1.33%。
5、重复性试验取：同一样品粉末(过40目筛)5份,每份0.5g,精密称定,加入80%甲醇100mL,冷浸1h,超声处理30min,滤过,残渣再超声提取1次。合并提取液,水浴蒸干,残渣用80%甲醇定容至10mL。样品溶液用0.45um微孔滤膜滤过,进样,测定。水晶兰苷峰面积的RSD为0.84%。
6、加样回收率试验：精密称取6份已知含量的样品粉末,每份0.5g,分别加入等量的标准品,按上述方法进行处理,测定含量。测得水晶兰苷平均回收率为102.19%，RSD为0.94%[1]。
提取研究
1、提取溶剂选择：取巴戟天粉末(过40目筛)10份,每份0.5g,精密称定。分别加入100mL 10种不同的溶剂，索氏提取5h,提取液水浴蒸干,残渣用甲醇定容至10mL,微孔滤膜滤过,所得样品溶液按上述色谱条件进样,测定水晶兰苷的提取量。结果表明:用80%甲醇作溶剂的提取率最高。
2、提取方法选择：巴戟天粉末0.5g,精密称定,用80%甲醇为提取溶剂,分别采用不同的提取方法进行提取,定容至10mL。样品溶液用微孔滤膜过滤,按上述色谱条件进样,测定水晶兰苷的提取量。
热回流提取:精密称取药材粉末0.5g,置150mL圆底烧瓶中,加入80%甲醇100mL,加热回流1h,放冷,滤过,残渣重复以上操作1次。合并滤液,水浴蒸干,残渣用80%甲醇定容至10mL。
结果表明:用超声提取法进行提取,水晶兰苷的提取率最高。残渣再按以上方法提取1次,定容至2mL,滤过,按上述色谱条件进样,在与水晶兰苷相同保留时间的位置处无峰,说明此法提取水晶兰苷完全。因此,在含量测定中应选用超声提取[1]。
参考文献
[1] 徐吉银,丁平. 巴戟天中水晶兰苷的提取方法研究[J]. 中成药,2007,29(6):893-895. DOI:10.3969/j.issn.1001-1528.2007.06.039.