盐酸溶菌酶,英文名Lysozyme hydrochloride,系自新鲜鸡蛋清中提取的一种粘多糖的碱性蛋白酶,与氯离子结合成为溶菌酶氯化物,CAS登录号9066-59-5。盐酸溶菌酶是一种具杀菌作用的天然抗感染物质，具有抗菌、抗病毒、抗炎、增加抗生素疗效及加快组织恢复的作用。临床上主要用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔贵疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。本文采用高效液相色谱法测定盐酸溶菌酶的含量，经方法学验证,本法简单,准确可靠,可用于盐酸溶菌酶片的质量控制。
检测方法[1]
1、色谱条件
色谱柱:Agilent ODS(150mmx4.6mm,5um);以三氟乙酸溶液(取三氟乙酸1ml,用水稀释至1000ml,滤过并脱气)为流动相A,乙腈溶液(取乙腈900ml,加水100ml,再加入三氟乙酸1ml,滤过并脱气)为流动相B,按表1进行梯度洗脱;流速:1.0ml/min;检测波长为276nm;进样量:20ul。理论板数按盐酸溶菌酶峰计算应不低于2000。
2、对照品溶液的制备
精密称取盐酸溶菌酶对照品约45mg,置100ml量瓶中,加溶剂(流动相A:流动相B=1 :1)30ml,超声使溶解并稀释至刻度,摇匀，经0.2um滤膜滤过,即得。
3、供试品溶液的制备
取本品20片,研细,精密称取样品适量(约相当于盐酸溶菌酶45mg),置100ml量瓶中,加溶剂(流动相A:流动相B=1:1)30ml,超声使溶解并稀释至刻度，摇匀,经0.2um滤膜滤过,即得。
4、空白溶液的制备
按照处方比例精密称取辅料适量,置100ml量瓶中,加溶剂(流动相A:流动相B=1:1)30ml,超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,经0.2um滤膜滤过,即得。
5、专属性
精密量取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液各20uI,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。主峰的保留时间约为21min,辅料不干扰盐酸溶菌酶含量测定。
6、线性关系考察
精密称取盐酸溶菌酶对照品约90mg,置100ml量瓶中,加溶剂(流动相A:流动相B=1:1)30ml,超声使溶解并稀释制成每1ml含0.9mg/ml的对照品储备溶液。精密量取该储备液3、4、5、6、7ml,分别置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,经0.2um滤膜滤过,分别进样,记录色谱图。以浓度X(ug/ml)为横坐标,峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线,回归方程分别为:Y=2.3092X +65.085,r=0.9992。
7、回收率试验
精密称量处方量80%、100%、120%的盐酸溶菌酶对照品,按处方量加入各辅料,照含量测定方法分析，计算平均回收率,结果盐酸溶菌酶的平均回收率为100.4%,RSD=0.8%,结果见表。
8、精密度试验
取对照品溶液,重复进样6次,盐酸溶菌酶峰面积值的RSD为0.7%,表明方法精密度良好。
9、稳定性试验
取同一份供试品溶液,分别于0,5,10,15,20,24h进样,测得样品中盐酸溶菌酶峰面积值的RSD为0.9%,表明样品供试液在24h内稳定性良好。
参考文献
[1] 张德强,莫祝容,柯东华. HPLC法测定盐酸溶菌酶片的含量[J]. 今日药学,2012,22(10):608-609,618.