背景技术
3Α-羟基-7-氧代-5Β-胆烷酸又名7-酮石胆酸，是制备熊去氧胆酸的重要中间体。而熊去氧胆酸是名贵中药熊胆的主要有效成分，具有增加胆汁酸分泌、并使胆汁成分改变、降低胆汁中胆固醇及胆固醇脂等功效，主要用于治疗胆石疾病。众所周知，熊胆是一种非常稀缺的资源，原因在于其获取的传统途径主要是依赖于人工养殖活熊取胆的方法。目前，这种周期长、收率低且不人道的传统途径逐渐被人工合成方法所取代，而现知的人工合成熊去氧胆酸的方法中，3Α-羟基-7-氧代-5Β-胆烷酸都是极为重要的中间体。
目前3Α-羟基-7-氧代-5Β-胆烷酸的工业化生产多采用化学法，但是存在操作条件苛刻、选择性低、污染环境、使用大量有机溶剂、存在有机溶剂残留、有毒有害等缺点。为了解决化学法存在的诸多缺点，人们另辟蹊径，寻找更好的生产途径。中国发明专利CN1912192B公开了一种采用电化学合成制备3Α-羟基-7-氧代-5Β-胆烷酸的方法，但是此种方法依然需要使用有机溶剂，并且成本较高。中国发明专利申请CN105368828A公开了一种采用全细胞催化制备3Α-羟基-7-氧代-5Β-胆烷酸的方法，但是此种方法需进行细胞发酵培养，存在反应时间长、操作繁琐、产物复杂等缺点。
合成方法
总体系1L，取50g含量为99%的鹅去氧胆酸，悬浮于100mM的磷酸钾缓冲液（pH8.0），用10M NaOH的调节pH到8.0后加入终浓度30g/L的丙酮酸钠，并依次加入0.09g7α-类固醇脱氢酶冻干粉（Y157W突变体酶）和0.07g乳酸脱氢酶冻干粉，最后加入终浓度为0.1g/L的NAD，底物终浓度为50g/L。在25℃、250rpm和pH8.0左右进行反应6h，转化率达99.8%。反应结束后，反应液滴加盐酸溶液至pH为1.2，继续搅拌30min后待冷却过滤、经水洗三次后真空干燥得到3Α-羟基-7-氧代-5Β-胆烷酸成品58g。成品用900ml无水乙醇60℃水浴条件下搅拌回流1h，过滤取滤液进行真空减压浓缩至200ml体积，再加入1L纯水搅拌1h，过滤，将滤饼真空干燥过夜即得3Α-羟基-7-氧代-5Β-胆烷酸精制品52g[1]。
参考文献
[1] 眉山市新功生物科技有限公司,邦泰生物工程(深圳)有限公司. 一种3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法及其制备用酶3:CN201710012411.6[P]. 2018-08-24.