简介
依来曲普坦是一种可特异性靶向Tet1酶的小分子化合物，其可通过特异性抑制Tet1酶的催化活性（对Tet2、Tet3酶活性及Tet1/2/3的mRNA、蛋白表达无显著影响），降低细胞内的DNA羟甲基化水平，为DNA羟甲基化相关的表观遗传调控研究提供了特异性工具，也为后续探索Tet1介导的生物学过程提供了新的干预手段。
依来曲普坦的性状
特异性抑制Tet1酶活性
Tet酶家族成员中的Tet1、Tet2、Tet3均能催化5mC形成5hmC，那么依来曲普坦降低细胞内的DNA羟甲基化水平是否仅通过抑制Tet1酶活性来实现的呢？依来曲普坦除了抑制Tet1酶活性以外是否也影响Tet2与Tet3酶活性。为了进一步探究依来曲普坦是否特异性抑制Tet1酶活性，首先本研究在HEK-293T细胞中进行了实验，分别过表达Tet1-CD、Tet1、Tet2、Tet3，转染12小时后分别给予10μM、100μM依来曲普坦处理，继续培养36小时后收样提取DNA，通过DotBlot检测DNA5hmC修饰水平。结果显示，在过表达全长Tet1蛋白后，与未给药组相比，10μM依来曲普坦对5hmC修饰水平没有改变，但100μM依来曲普坦可显著降低5hmC修饰水平(P<0.01)；过表达Tet2和Tet3蛋白后，与未给药组相比，10μM与100μM依来曲普坦对5hmC修饰水平则没有影响（图3C-F）。由于酶活性主要由酶的催化结构域决定，因此本研究继续探究了依来曲普坦对Tet1-CD活性的影响。DotBlot结果显示，在过表达Tet1-CD结构域后，与未给药组相比，10μM(P<0.001)和100μM(P<0.01)依来曲普坦均可显著降低5hmC修饰水平，具有统计学差异，这进一步表明，与全长Tet1相比，依来曲普坦对Tet1-CD的酶活影响更显著。综上所述，依来曲普坦可有效通过抑制Tet1酶活性降低细胞内的DNA羟甲基化水平[1]。
Tet酶的活性及其表达水平均会影响羟甲基化水平。以上结果已证实依来曲普坦仅抑制Tet1酶活性，但是对Tet1、Tet2、Tet3的表达是否产生影响还不清楚。为了进一步研究依来曲普坦对Tet1、Tet2、Tet3表达的影响，本研究利用10μM依来曲普坦处理HT22细胞，培养36小时后收样，通过qPCR与WesternBlot分别检测Tet1、Tet2、Tet3的mRNA与蛋白表达变化。结果显示依来曲普坦不影响细胞内Tet1、Tet2和Tet3的mRNA水平和蛋白水平。综合依来曲普坦对三种Tet酶活性和表达的影响可知，依来曲普坦通过特异性抑制Tet1酶活性降低细胞内的DNA羟甲基化水平[1]。
参考文献
[1] 王文娟. Tet1抑制剂依来曲普坦在小鼠中具有抗抑郁作用[D]. 苏州大学, 2023. DOI:10.27351/d.cnki.gszhu.2023.001856.