简介
RAW264.7是一种来源于小鼠的单核巨噬细胞系，具有典型的巨噬细胞生物学特性，广泛应用于炎症反应、免疫调节及相关疾病机制的体外研究。其对多种外界刺激敏感，可被壳寡糖（COS）等生物活性物质影响，且在200μM浓度下，不同聚合度的壳寡糖对细胞活力均无显著毒性干扰，是研究天然产物抗炎、免疫调节活性的理想细胞模型之一。
RAW264.7的性状
培养方法
（1）细胞培养
RAW264.7小鼠巨噬细胞在装有完全培养基（补充有10%的FBS、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养基）的细胞培养瓶中培养，并将其放置于温度恒定为37℃、CO₂浓度为5%的二氧化碳培养箱里培养。每日通过倒置显微镜观察细胞生长状态，确保细胞保持良好的形态[1]。
（2）细胞复苏
将装有待复苏的细胞的冻存管迅速放置于37℃的水浴锅中解冻。使用镊子夹住细胞冻存管的管身，轻轻晃动后，使其在1min左右融化，避免细胞在融化过程中因冰晶的产生而受损。使用75%酒精对该细胞冻存管外壁进行喷洒消毒处理，转移至洁净工作台，然后在转速为1000rpm条件下离心5min，弃去上清液，加入1mL完全培养基重悬细胞，尽量使其均匀分布。最后，将细胞转移至装有5mL完全培养基的细胞培养瓶中，置于37℃、5%的CO₂的二氧化碳培养箱里培养，24h后更换新鲜培养基[1]。
（3）细胞传代
当细胞形态圆润，分化程度低且密度达到80%左右，即可进行传代。首先，弃去旧培养基，使用2mL的PBS溶液轻轻洗去残留培养基，再弃去PBS溶液。随后加入4mL完全培养基，使用无菌细胞刮刀，轻轻刮下贴壁生长的细胞，并使用移液枪对细胞进行重悬至其均匀后，按1：2的传代比例，将每2mL的细胞悬液转移至装有4mL完全培养基的细胞培养瓶中，放置于37℃、5%的CO₂的二氧化碳培养箱中培养。每48h传代一次[1]。
壳寡糖对RAW264.7细胞活力的影响
RAW264.7细胞生长24h后细胞密度达到80%左右，细胞形态完整，贴壁良好，选择该培养时间研究不同聚合度的壳寡糖（COS1-7）对RAW264.7细胞活力的影响。实验结果显示，在COS1-7浓度达400μM时对细胞活力未表现出抑制作用，这表明在本实验条件下，COS1-7对细胞无明显毒性作用。值得注意的是，当COS4浓度为400μM时，其对细胞活力具有轻微的促进作用（p<0.05），而在25μM至200μM的浓度范围内，该作用并不显著（p>0.05）。这一发现与以往的研究结果相一致。先前的研究表明，聚合度为2至6的壳寡糖（COS2-6）对RAW264.7细胞几乎无毒性，并且在600μM的浓度下，甚至能够促进细胞生长[1]。
参考文献
[1] 赵梦婷. 聚合度对壳寡糖抑制LPS诱导RAW264.7产生炎症的影响[D]. 广西大学, 2025. DOI:10.27034/d.cnki.ggxiu.2025.003264.