刺五加叶中的结构鉴定与抗氧化活性

刺五加叶中是两头尖中重要的活性成分，但目前对其抗氧化活性研究较少，本文以刺五加叶中作为研究对象，采用电子自旋共振仪探究其对于烷基自由基、羟基自由基和DPPH自由基的清除作用。同时以Vero细胞作为研究模型，研究其对过氧化氢诱导的Vero细胞的保护作用及其对细胞内活性氧生成速率的影响，探讨刺五加叶中的抗氧化作用，为深入研究刺五加叶中抗氧化的机制奠定基础。

结构鉴定

刺五加叶中为白色无定型粉末，无臭无味。采用JEOL JNM-ECP 600MHz核磁共振光谱仪测定，以C5D5N为溶剂。¹H-NMR谱δ1.25 (s,3H,CH3),1.18(s,3H,CH3),1.11 (3H,s,CH3),1.11(3H,s,CH3)，0.88(s,9H,3个CH3)。1.65,1.74(各3H，d,J=5.9Hz和J=5.05Hz，鼠李糖的CH3)，4.90(1H,d,J-7.0Hz端H),4.77(1H，d,J=6.2Hz，端基H)，5.41(1H,brs,C₁₂-H)，5.93,6.21(各1H,brs，鼠李糖的端基H)，6.28 (1H，d,J=7.6Hz，端基H)[1]。

活性研究^[1]

1、刺五加叶中清除烷基自由基、羟基自由基、DPPH自由基的活性研究

刺五加叶中清除烷基自由基活性半数抑制浓度IC₅₀为0.123mg・mL^-1，羟基自由基活性半数抑制浓度IC₅₀为0.204mg・mL^-1, DPPH自由基活性半数抑制浓度IC₅₀为0.439mg・mL^-1。本实验表明两头尖总皂苷具有良好的抗氧化作用。

2、刺五加叶中对过氧化氢诱导的Vero细胞的保护作用

在前期预实验过程中，发现当刺五加叶中浓度<100ug·mL^-1时对Vero细胞没有明显的毒性。因此，在本实验中给药浓度控制在100ug・mL^-1以下。采用MTT法检测不同浓度的刺五加叶中对1mM的过氧化氢诱导的Vero细胞损伤的保护作用。实验结果表明，过氧化氢减少细胞存活率至39.79%，然而刺五加叶中处理组在浓度分别为25ug・mL^-1、50ug・mL^-1和100ug・mL^-1时其细胞存活率分别为42.20%、52.29%和55.11%。其IC₅₀值为(52.29±1.87)ug・mL^-1。本实验说明刺五加叶中对于过氧化氢诱导的Vero细胞氧化损伤具有良好的保护作用且呈现良好的量效关系。

3、刺五加叶中对过氧化氢诱导的Vero细胞的活性氧生成率的研究

本实验采用DCFH-DA荧光法检测Vero细胞中的活性氧生成率。实验结果表明，当Vero细胞采用过氧化氢诱导后，细胞内活性氧生成率明显随着刺五加叶中浓度的增加而减少。本实验说明刺五加叶中对于过氧化氢诱导的Vero细胞中活性氧的生成具有抑制作用且呈现良好的量效关系。

参考文献

[1] 刘鑫,温健,李剑男. 常春藤皂苷B抗氧化活性研究[J]. 长春中医药大学学报,2023,39(5):515-518. DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2023.05.011.