介绍
铬花氰 R（Mordant Blue 3，C.I. 43820），又称依来铬氰蓝 R、铬花青 R与 Solochrome cyanine R，是一类三苯甲烷类媒介染料。该染料自 1906 年起应用于纺织工业染色，1957 年被引入生物组织染色领域，同时在分析化学中用作金属离子指示剂与分光光度检测试剂。2020 年，美国生物染色委员会（Biological Stain Commission, BSC）正式建立了该染料的生物染色认证标准，进一步规范了其在组织学与病理学领域的质量要求与应用场景。
图一 铬花氰 R
特征
铬花氰 R本质是带有多个可解离基团的芳香磺酸化合物，存在色酸与三钠盐两种商用形式。其溶液颜色具有显著的 pH 依赖性：pH 4.0 的酸性条件下呈红色，特征吸收峰位于 515 nm 附近；pH 12–13 的强碱性条件下形成四价阴离子，溶液呈蓝色，特征吸收峰移至 585 nm。该强碱性体系下的吸收光谱不受微量铁盐等杂质干扰，且在空气与光照下稳定性良好，因此被作为染料含量测定的标准体系。
市售铬花氰 R通常混有硫酸钠或氯化钠等无机盐填充剂，还含有少量黄色、橙色有机副产物，纯染料占比通常约为产品总重的一半。通过盐酸沉淀出色酸、再经氯仿萃取的方法可获得高纯度染料，用于氟离子、铝、铁等的微量分析；但生物染色场景下无需高度纯化，一定含量的盐类反而与已建立的经典染色方案相匹配。此外，可通过简单的斑点试验快速定性鉴别该染料：浓硫酸中溶解呈红色，加水稀释后变黄并析出沉淀；水溶液中加氢氧化钠后由红变蓝；95% 乙醇中呈橙黄色。
生物染色应用
铬花氰 R的生物染色应用均依赖其与三价铁离子形成的蓝色金属络合物，主要用于细胞核染色与神经组织髓鞘染色两大类。
细胞核染色
与铁离子配伍的铬花氰 R 可实现对细胞核的选择性蓝色染色，操作流程分为渐进式与退行式两种，与常规苏木精（hemalum）染色方法高度兼容。渐进式染色通过醋酸钠溶液洗去游离染料，5 分钟即可完成染色；退行式染色则先过度染色，再经酸性乙醇分色，可获得更清晰的核质对比度。两种方法均能得到清晰的蓝色细胞核，搭配伊红复染后可实现经典的红蓝对比效果，适用于常规组织学与病理切片染色。相较于传统铝 - 苏木精染液，铁-铬花氰 R复合物的耐酸性更强，可替代 Weigert 铁苏木精，用于 Van Gieson 苦味酸 - 品红染色、Masson 三色染色等后续含酸性试剂的染色流程，避免核染色被酸性溶液脱失。此外还有单液双色染色方案，可在一次染色中同时实现蓝色细胞核与红粉色细胞质的对比效果，操作更为简便。
图二 细胞核染色
髓鞘染色
铬花氰 R与铁盐配伍还可用于神经组织的髓鞘退行性染色，髓鞘与红细胞被特异性染为蓝色，效果与经典的 Luxol 固蓝 MBS（溶剂蓝 38）高度相似。该方法室温下仅需 15–20 分钟染色，再经铁矾溶液分色 10–15 分钟，全程 1 小时内即可完成，远快于传统固蓝染色所需的 55–60℃孵育 18–24 小时。染色后可搭配中性红等尼氏染料复染，同时显示神经元胞体与髓鞘结构，是神经组织学研究中高效便捷的髓鞘染色选择[1]。
参考文献
[1]C F ,A J K .Certification procedures used by the Biological Stain Commission for eriochrome cyanine R (C.I. 43820, Mordant blue 3).[J].Biotechnic & histochemistry : official publication of the Biological Stain Commission,2020,95(5):396-402.DOI:10.1080/10520295.2020.1748229.