简介
中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)细胞是一种常用的哺乳动物细胞表达系统，其中CHO-GS细胞系统将外源蛋白的目的基因和谷氨酰合成酶(glutamine synthetase,GS)基因标记的表达载体转染于CHO细胞。在缺乏细胞外谷氨酰胺的培养条件下，加入GS的抑制剂L-蛋氨酸磺酸盐(L-methionine sulphoximine,MSX)可使GS基因及与之相连的目的蛋白基因一起扩增，达到提高目的蛋白基因表达水平的目的，从而缩短筛选周期，提高蛋白表达水平，同时也保证了细胞处于较好的生长状态。但将L-蛋氨酸磺酸盐加入细胞培养过程，可能使其引入到所表达的蛋白料液中，如目标蛋白为重组蛋白药物，L-蛋氨酸磺酸盐在蛋白料液中的残留可能给使用该重组蛋白药物的患者带来风险。根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品技术要求国际协调理事会中的要求，应对生物制药工艺中可能出现的杂质作出评估，其可能会影响药品的安全性和有效性，而L-蛋氨酸磺酸盐作为培养基中的添加物，应被列为工艺相关杂质，需对其残留量进行检测[1]。
L-蛋氨酸磺酸盐的性状
含量检测方法
L-蛋氨酸磺酸盐是蛋氨酸的特殊衍生物，具有氨基酸的基本结构(氨基、羧基、R基侧链)，因此其化合物极性较强、紫外吸收较弱，给其残留量检测带来了一定的困难。目前对L-蛋氨酸磺酸盐的检测文献报道多为衍生法，但衍生法存在操作步骤较复杂、衍生物不稳定及衍生试剂存在毒性等缺点。GELSOMINO等采用邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde)衍生法检测L-蛋氨酸磺酸盐含量，但衍生物不稳定，需立即进样分析；张文宇等采用三乙胺和异硫氰酸苯酯衍生方法检测MSX含量，在1.5626 ~ 50 μmol/L范围内有良好的线性关系，但该方法衍生程序复杂，衍生时间较长；张存超等采用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺氨基甲酸酯衍生法检测L-蛋氨酸磺酸盐含量，检测下限为5 μmol/L，但该方法需先将样品用醋酸调节pH至5.5，过滤后再进行衍生反应。偶有文献报道采用非衍生方法，但需借助较昂贵的检测器，CHIN等采用Acclaim Trinity P1色谱柱结合电雾式检测器对L-蛋氨酸磺酸盐进行分析，其色谱峰保留时间约为3 min，同时考察了甲酸铵浓度、流动相pH、有机相比例及柱温对其保留时间的影响，发现上述参数的变化对L-蛋氨酸磺酸盐的保留时间影响很小[1]。
参考文献
[1] 王立志,杨嘉明,李本强,等. 重组蛋白药物中L-蛋氨酸亚砜亚胺残留量反相离子对色谱检测方法的建立与验证 [J]. 中国生物制品学杂志, 2025, 38 (4): 450-456+461. DOI:10.13200/j.cnki.cjb.004457