异戊烯基黄酮类化合物已从药用植物中提取分离获得。研究表明,异戊烯基黄酮类化合物有多种生物活性,如降血压、抗病菌、抗肿瘤、抗HIV等;据报道,黄酮类化合物中异戊烯基的存在可引起相关生物活性的显著提高。其中,化合物补骨脂甲素,化学名为2,3-二氢-7-羟基-2-(4羟苯基)-6-(3-甲基-丁基-2-烯基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮],是Bhalla等从Posralea Corylifolia的种子中提取得到的一个异戊烯基黄烷酮,具有抗血小板活性[1]。
研究进展
最近的研究表明，补骨脂甲素具有抗炎、抗氧化、 抗凋亡、调节免疫等重要药理作用。Wang等研究表明，补骨脂甲素可抑制从而下调TNF受体相关因子和NF-κB信号通路，发挥抗神经炎症作用。Hung等发现，在J774A细胞中，补骨脂甲素可抑制LPS诱导的NO和PGE2的产生，降低iNOS和mPGES-1的表达，发挥抗炎作用。Ye Tao等研究表明，补骨脂甲素能够抑制金黄色葡萄球菌诱导的RAW264.7细胞损伤[2]。
为探讨补骨脂甲素对神经胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及作用机制。吴岳珊等人以不同浓度的补骨脂二氢黄酮(0、1、5、10、20、50μmol/L)处理胶质瘤细胞U87MG;采用CCK-8法检测神经胶质瘤细胞的增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;AnnexinV-FITC/PI双染细胞凋亡法检测细胞凋亡;Western blot检测神经胶质瘤细胞ABCE1蛋白的表达。结果，补骨脂甲素能剂量依赖性地抑制神经胶质瘤细胞U87MG(IC50=11.18μmol/L)的增殖。而且随着补骨脂甲素药物浓度的增加,U87MG细胞迁移能力显著降低,PI标记红色荧光和Annexin V-FITC标记绿色荧光的数量逐渐增多,U87MG细胞凋亡。补骨脂甲素作用的U87MG细胞中ABCE1表达呈剂量依赖性下降。结论，补骨脂甲素通过下调ABCE1蛋白表达水平诱导细胞凋亡从而抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移,其具有抑制胶质瘤的作用,临床上值得推广[3]。
合成方法[1]
1、2,4-二羟基-5-异戊烯基苯乙酮(4b)
将5.0g(0.033mol)2,4-二羟基苯乙酮溶于125mL无水丙酮中,在搅拌下滴加1.3当量的NaOH水溶液10mL,待析出固体后,滤集干燥，然后将此钠盐加入75mL无水苯中,加热回流下滴加3.0g异戊烯基溴,加毕,反应4h,再滴加3.0g异戊烯基溴,继续加热回流15h,减压蒸去苯液,残留物加60mL水稀释,用乙醚提取,醚液用无水硫酸钠干燥后,蒸去乙醚,残留物用硅胶柱色谱(苯-石油醚=1:1)分离得到1.4g无色晶体(4a),mp157~158℃，产率20%和980mg白色针状晶体(4b),mp143~144℃,产率14%)。
2、4-甲氧基亚甲氧基-5-异戊烯基-2-羟基苯乙酮(5)
将660mg(3mmol)化合物4b,0.5g无水碳酸钾、50mL无水丙酮混合均匀后,加入300mg(3.75mmol)氯甲基甲醚,加热回流30min，冷却,抽滤,减压蒸去丙酮,残留物用硅胶柱色谱(石油醚-醋酸乙酯=20:1)分离得到580mg淡黄色液体(5),产率73%。
3、4,4'-二甲氧基亚甲氧基-5'-异戊烯基-2'-羟基查尔酮(6)
将470mg(1.78mmol)化合物5与296mg(1.78mmol)对甲氧基亚甲氧基苯甲醛混合于3mL乙醇中，冷却至0℃。另将含1.5g KOH的60%乙醇水溶液3mL冷却至0℃后,滴加到混合液中。氮气保护下,冰浴冷却搅拌3h，然后室温搅拌33h,将反应液倒入冰水中,用稀盐酸酸化至pH3~4,用乙醚萃取后,醚液水洗至中性,无水硫酸钠干燥后,蒸去乙醚,残留物经硅胶柱色谱(石油醚-醋酸乙酯=15:1)分离得到550mg黄色胶状物(6),产率75%。
4、4',7-二甲氧基亚甲氧基-6-异戊烯基黄烷酮(7)
将500mg(1.21mmol)化合物6和500mg 无水醋酸钠混合于5mL乙醇中,加3滴水使醋酸钠溶解,加热回流24h后,将反应液倒入冰水中,用乙醚萃取,有机相水洗后用无水硫酸钠干燥,浓缩,将残留物经硅胶柱色谱(石油醚-醋酸乙酯=10:1)分离得到360mg淡黄色胶状物(7),产率72%。
5、补骨脂甲素(1)
将300mg(0.73mmol)化合物7溶于10mL甲醇中,加入2mL 3mol/L盐酸,加热回流30min,冷却后,向反应液中加水15mL,用醋酸乙酯萃取,水洗，干燥,浓缩,硅胶柱色谱分离后,用乙醇-水重结晶得到180mg补骨脂甲素为白色晶体(1),产率76%,mp184~185℃。
参考文献
[1] 于令军,胡永洲. 补骨脂二氢黄酮的合成方法研究[J]. 中国药学杂志,2005,40(13):1029-1031. DOI:10.3321/j.issn:1001-2494.2005.13.025.
[2] 周欣. 补骨脂二氢黄酮对LPS诱导的急性肺损伤的保护作用及机制研究[D]. 十堰:湖北医药学院,2024.
[3] 吴岳珊,常婧,葛娟娟,等. 补骨脂二氢黄酮对神经胶质瘤细胞增殖、迁移、凋亡及ABCE1表达的影响[J]. 湖北科技学院学报（医学版）,2022,36(3):220-223. DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2022.03.0220.