HCT 116为人结肠癌细胞系，上皮样贴壁生长，携带KRAS（Gly13Asp）突变，微卫星不稳定，裸鼠可成瘤，遗传稳定，是结直肠癌体外分子机制与药物活性研究的经典细胞模型。
实验研究
刘丹等人探讨了lncRNA SOX2-OT是否通过调控miR-215-5p/NIN1/RPN12结合蛋白1同源物(NOB1)信号通路抑制结直肠癌(CRC)HCT 116细胞增殖和迁移。方法:收集2022年6月至2024年5月期间武汉市金银潭医院收治的29例CRC患者的癌及癌旁组织标本,以及CRC细胞SW480、HCT 116、HP116和LoVo及人结肠上皮细胞HCoEpiC，qPCR法检测CRC组织和细胞中SOX2-OT、miR-215-5p和NOB1 mRNA的表达水平。利用RNA干扰技术分别将敲低或过表达SOX2-OT质粒及阴性对照质粒转染至HCT 116细胞,实验分为对照组、si-NC组、si-SOX2-OT组、si-SOX2-OT+inhibitor(Inh)NC组、si-SOX2-OT+miR-215-5p Inh组、si-SOX2-OT+oe-NC组、si-SOX2-OT+oe-NOB1组。qPCR法检测各组细胞中SOX2-OT、miR-215-5p和NOB1 mRNA表达水平,通过MTT、划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡水平,WB法检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Bcl-2、BAX、PCNA、MMP-9和NOB1蛋白表达水平。通过双萤光素酶报告基因实验验证miR-215-5p与SOX2-OT和NOB1之间的靶向关系.结果:CRC组织和细胞中SOX2-OT和NOB1 mRNA均呈高表达、miR-215-5p低表达(均P<0.05)。敲低SOX2-OT表达的HCT-116细胞中SOX2-OT和NOB1 mRNA表达水平、增殖、划痕愈合率和侵袭细胞数量,以及细胞中N-cadherin、vimentin、Bcl-2、NOB1、PCNA和MMP-9蛋白表达均显著降低(均P<0.05),miR-215-5p、细胞凋亡率、E-cadherin和BAX蛋白表达均显著升高(均P<0.05)，敲低miR-215-5p表达或上调NOB1表达均可减弱敲低SOX2-OT表达对细胞的抑制作用(均P<0.05)，miR-215-5p与SOX2-OT和NOB之间存在靶向关系。结论:敲低SOX2-OT表达可促进miR-215-5p表达,抑制NOB1表达进而抑制HCT 116细胞的增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡[1]。
霍怡杉等人探究了β-半乳糖苷α-2-6唾液酸转移酶1(ST6GAL1)对结直肠癌(CRC)HCT 116细胞糖酵解和迁移、侵袭的作用及可能的分子机制。方法:通过检索GEPIA2数据库,分析ST6GAL1在CRC患者和健康人群中的表达差异;WB法检测ST6GAL1在CRC细胞HCT 116、SW480、Caco-2、HT29、LoVo和人正常结肠上皮细胞NCM460细胞中的表达差异;免疫组织化学法分析ST6GAL1在CRC组织和对应癌旁组织中的表达差异。通过慢病毒转染细胞的方法构建稳定敲低或过表达ST6GAL1的HCT 116细胞,通过划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,WB法检测细胞糖酵解相关蛋白、Notch1受体胞内段(Notch1 ICD)以及PI3K/AKT/mTOR通路磷酸化水平,细胞免疫荧光实验观察Notch1 ICD表达水平和进入细胞核情况;加入Notch1受体激动剂Jagged1处理HCT 116细胞,通过WB法检测糖酵解相关蛋白、Notch1 ICD表达水平以及PI3K/AKT/mTOR通路磷酸化水平。结果:ST6GAL1在CRC组织和细胞中均表达上调(均P<0.05)，与对照组和过表达组相比,敲低ST6GAL1导致HCT 116细胞内Notch1 ICD表达水平和PI3K/AKT/mTORC1磷酸化水平显著降低,细胞糖酵解相关蛋白表达水平降低,细胞迁移和侵袭能力减弱(均P<0.05);过表达ST6GAL1增加了HCT 116细胞内Notch1 ICD表达水平并促进其进入细胞核,细胞糖酵解相关蛋白表达水平升高,细胞迁移和侵袭能力增强(均P<0.05)。结论:ST6GAL1通过活化Notch1受体进而磷酸化激活PI3K/AKT/mTORC1通路,并增强CRC细胞糖酵解水平和迁移、侵袭能力[2]。
罗燕等人观察了重楼皂苷Ⅲ对结肠癌细胞HCT 116增殖、周期、凋亡的影响,探讨其治疗结肠癌作用机制。方法：体外培养结肠癌HCT 116细胞,将细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅲ低、中、高剂量组,分别用不含药培养基和低、中、高浓度重楼皂苷Ⅲ进行干预,采用CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期与凋亡,RT-PCR、Western blot分别检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6、视网膜母细胞瘤蛋白(RB)、p-RB、Bax、Bcl-2、Bcl-xl mRNA及蛋白表达。结果：与对照组比较,重楼皂苷Ⅲ各剂量组HCT 116细胞活力降低(P<0.01),G0～G1期细胞比例升高(P<0.01),S期、G2～M期细胞比例降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01),cyclinD1、CDK4、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl mRNA及cyclinD1、CDK4、CDK6、p-RB、Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达降低,Bax mRNA及蛋白表达升高,且呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论：重楼皂苷Ⅲ可抑制体外培养的结肠癌细胞增殖并促进细胞凋亡,将细胞阻滞在G0～G1期,其机制可能与抑制细胞周期相关蛋白及凋亡相关蛋白表达有关[3]。
参考文献
[1] 刘丹,程海林,罗剑锋. lncRNA SOX2-OT调控miR-215-5p/NOB1通路抑制结直肠癌HCT-116细胞增殖和迁移[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志,2025,32(7):731-737. DOI:10.3872/j.issn.1007-385x.2025.07.008.
[2] 霍怡杉,吴会丽,段相冰,等. ST6GAL1通过激活Notch1/PI3K/AKT/mTORC1途径促进结直肠癌HCT116细胞糖酵解和迁移、侵袭[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志,2025,32(5):469-475. DOI:10.3872/j.issn.1007-385x.2025.05.003.
[3] 罗燕,蒋益兰,曾千,等. 重楼皂苷Ⅲ对结肠癌细胞HCT116增殖、周期、凋亡的影响及其作用机制[J]. 中国中医药信息杂志,2025,32(6):80-85. DOI:10.19879/j.cnki.1005-5304.202409610.