Hedgehog（Hh）信号通路下游的锌指转录因子家族在脊椎动物中有GLI1、GLI2和GLI3三个成员，GLI3抗体是针对GLI3蛋白（GLI家族锌指蛋白3）的特异性抗体，主要用于科研领域对GLI3蛋白及相关信号通路的检测与研究。
胃癌方向的研究留下了较为完整的抗体使用记录[1]。该研究以24例经肿瘤切除术的胃癌标本及配对癌旁非肿瘤组织为对象，免疫组织化学采用ABC法，石蜡切片厚度4 μm，依次脱蜡、水化、抗原修复、阻断内源性过氧化物酶并作血清封闭，随后滴加1:200稀释的兔抗GLI3单克隆抗体，37 ℃孵育1 h，再以生物素-山羊抗兔IgG工作液与辣根过氧化物酶-链霉卵白素工作液各孵育30 min，0.1% DAB显色5 min，苏木素复染20 s。结果显示，GLI3抗体在癌旁正常胃黏膜中呈阴性，在胃癌组织中呈阳性并随分期增加而增强。研究者进一步以shRNA敲低GLI3，细胞增殖、迁移与侵袭均受抑制，β-catenin与N-钙粘蛋白水平下降、E-钙粘蛋白升高。相应的细胞系Western blot（一抗1:2000、室温2 h、20 μg上样、GAPDH内参）与β-catenin免疫荧光（1:200、4 ℃过夜）为上述表型提供了一致的蛋白层面读数[1]。
非小细胞肺癌方向的两篇研究同样用GLI3抗体做免疫组化，报告的高表达率却差得不小。研究纳入60例患者，以pH 6.0柠檬酸修复液配合高压加热法修复抗原，GLI3抗体按1:100稀释后4 ℃孵育过夜，多聚物酶标二抗37 ℃孵育45 min，癌组织高表达率为88.33%（53/60），癌旁组织为36.67%（22/60），腺癌高于鳞癌，有淋巴结转移者高于无转移者。相关性分析中，GLI3蛋白表达与淋巴结转移、不良预后的相关系数分别为0.334与0.456[2]。另一研究纳入82例，癌组织高表达率为59.8%（49/82），癌旁组织为37.8%（31/82），高表达与肿瘤直径及淋巴结转移有关。按GLI3抗体染色水平分组后，高表达者中位生存时间为50个月，低表达者为57个月[3]。两篇的癌旁数据几乎重合，癌组织却相差近29个百分点。
复用GLI3抗体时有几点可以提前固定：一是确认免疫原落在GLI3蛋白的靶区段，并避开与GLI1、GLI2高度同源的锌指区，必要时以同源蛋白过表达裂解液作交叉反应检查。二是把修复液种类与加热强度固定在同一批实验内，不跨批混用，并留意批间一致性。三是以同批切片中的癌与癌旁配对标本作内部对照，同时保留以PBS替代一抗的阴性对照[3]。细胞层面还可借助免疫荧光GLI3抗体核对核质分布，用免疫印迹核对条带分子量位置。
参考文献
[1] 袁博, 常占国, 马磊. 敲低GLI3抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭和下调促上皮间质转化相关蛋白水平[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2022, 31(4): 367-373.
[2] 冯海玲, 范长玲, 潘中军, 等. NSCLC癌组织中DCLK1、Caspase-3和GLI3蛋白表达情况与淋巴结转移和预后的相关性[J]. 国际检验医学杂志, 2021, 42(21): 2672-2675.
[3] 陈盈盈, 李晓琴, 刘春玲. 非小细胞肺癌组织中GLI3蛋白的表达变化及其意义[J]. 山东医药, 2019, 59(18): 36-39.