线粒体三功能蛋白（MTP）是位于线粒体内膜的多聚复合体，由4个α亚基（HADHA）与4个β亚基（HADHB）构成，负责催化脂肪酸β-氧化通路的最后三个步骤[1]。HADHB既是复合体的结构亚基，也是3-酮脂酰辅酶A硫解酶的催化单元，对它的称谓也并不统一，羟脂酰辅酶A脱氢酶三功能多酶复合体β亚基、羟酰辅酶A脱氢酶β亚基与线粒体三功能蛋白β亚基指向同一分子。HADHB抗体是用于识别和结合HADHB蛋白（线粒体三功能蛋白的β亚基）的科研试剂。它在脂肪酸β氧化和能量代谢研究中至关重要。
用益气养阴祛瘀方干预干燥综合征小鼠8周，以转录物组与蛋白质组联合测序锁定靶点。模型组与对照组间筛出1 523个差异基因与182个差异蛋白，治疗后另有23个基因与蛋白在两层面同步变化，HADHB是三个转录与蛋白同时变动者之一，由此被视为关键靶点。该研究用HADHB抗体做了两种场景复核，免疫组化以柠檬酸缓冲液修复、3%双氧水室温避光孵育25 min、3%牛血清白蛋白封闭30 min、一抗4 ℃过夜、二抗室温50 min、DAB显色，棕黄色阳性信号在模型组减少、治疗组回升。免疫印迹以1∶3 000的一抗4 ℃过夜，TBST洗膜3次后加荧光二抗孵育1 h，ImageJ读取灰度，模型组Hadhb蛋白显著降低、治疗组显著升高[2]。
邓慧芳的高原心肌损伤研究提供了另一类组织与抗体参数。单细胞测序显示，低压低氧小鼠心肌中HADHA与HADHB转录水平显著降低。随后用HADHB抗体在人心肌细胞AC16与小鼠心脏上读数，免疫印迹按1∶2 000稀释、5%脱脂奶粉室温封闭1 h、一抗室温慢摇4 h、HRP二抗1∶5 000室温孵育1 h。免疫荧光把同一抗体改为1∶100，切片经4%多聚甲醛固定与EDTA微波修复后封闭，二抗为CY3山羊抗兔IgG 1∶300。两条线结果一致，低氧使HADHB蛋白下降，川芎嗪可上调其表达，该效应可被CaMKIIδ抑制剂KN93复制[3]。
研究把HADHB抗体带到人组织层面，91例肝门部胆管癌组织芯片，免疫组化采用EnVision二步法与柠檬酸热修复，以PBS替代一抗作阴性对照，HADHA抗体为Santa Cruz的E-8克隆、HADHB抗体为C-6克隆，阳性信号定位于细胞浆、呈淡黄至棕褐色。以阳性细胞比率与染色强度相乘的二级记分法判读，比率低于5%直接计0分、乘积不小于1为高表达。HADHB在癌组织中的表达率显著高于癌旁组织，并与手术切缘、淋巴结转移有关。Cox多因素分析显示，只有HADHB是影响总生存与无进展生存的独立因素，高表达者中位总生存14个月、低表达者42个月，HADHA未列入[3]。另外，HADHA与HADHB在肾细胞癌、直肠癌与乳腺癌中被报道为低表达，在肺癌中却上调并介导铂类耐药[3]。
实验证实，HADHB抗体可用于多种实验技术，组织免疫印迹给的是条带灰度比值，免疫荧光给的是荧光强度，酶联免疫吸附测定给的是带单位的质量浓度，人组织芯片给的则是有序分级的半定量评分。市面上的HADHB抗体主要分为多克隆和单克隆两种，多克隆抗体通常由兔等宿主产生，可识别多个表位，信号可能更强，单克隆抗体由单一B细胞克隆产生，特异性高，批次间一致性好，适合需要精确结果的实验。
选用HADHB抗体时建议核对四点。其一是亚基归属，MTP由4个α亚基与4个β亚基组成，抗HADHB抗体与抗HADHA抗体不可互相替代。其二是物种与基质覆盖，三篇分别用了人组织芯片、人源心肌细胞与小鼠骨骼肌，以人源序列为免疫原者用于啮齿类前应先验证。其三是跨场景复用，同一抗体在变性印迹与原位固定条件下的工作浓度并不一致，换场景前需重新标定。其四是内部对照，除PBS替代一抗外，可加同源亚基HADHA裂解液作交叉反应对照。
参考文献
[1] 章宏, 廖剑, 杨霞, 等. 线粒体三功能蛋白亚基A、B在肝门部胆管癌中的临床意义[J]. 临床肿瘤学杂志, 2017, 22(7): 607-612.
[2] 赵婷, 沈悦, 焦文悦, 等. 益气养阴祛瘀方通过促进Hadhb表达减轻干燥综合征小鼠骨骼肌损伤及相关代谢紊乱[J]. 中国病理生理杂志, 2025, 41(9): 1793-1806.
[3] 邓慧芳. 基于脂质代谢的高原心肌损伤及其川芎嗪防治机制研究[D]. 北京: 军事科学院, 2025.