NDUFA10（NADH脱氢酶〔泛醌〕1α亚复合体10，约42 kDa）是线粒体呼吸链复合物Ⅰ的附属亚基，镶嵌于线粒体内膜，直接参与NADH向泛醌的电子传递与氧化磷酸化。NDUFA10抗体是用于检测 NDUFA10 蛋白的科研试剂，是研究线粒体功能、相关疾病（如Leigh综合征）的重要工具。
NDUFA10抗体对“多位点迁移”磷酸化状态的定性解释
在海洛因成瘾和正常大鼠前额叶皮质差异蛋白的分离与鉴定的研究中，以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向，分别对正常对照大鼠和海洛因成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离，2-D图谱经ImageMaster 2D5.0软件分析，选取7个差异蛋白点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱/串联质谱进行鉴定[1]。结果，经肽指纹图谱和串联质谱分析，并在NCBlnr数据库检索，选取的7个蛋白点被成功鉴定为5种蛋白，成瘾组特有的是葡萄糖调节蛋白58和26s蛋白酶复合体亚基p40.5，成瘾组含量下调的蛋白是ATP合酶D链，NduGa10和a-烯醇化酶在两组中发生相对分子质量和(或)等电点迁移[1]。此研究结论为，双向电泳结合质谱分析初步鉴定了大鼠前额叶皮质中与海洛因成蟋和神经毒性相关的差异蛋白，为进一步深人研究其病理机制奠定了基础[1]。本研究说明，在神经毒性这类以修饰状态变化的实验中，NDUFA10抗体的应用，是负责把质谱鉴定的差异蛋白点，按磷酸化状态逐一识别与灰度定量。
NDUFA10抗体在氧化应激定量中的应用
将NDUFA10作为氧糖剥夺（OGD）损伤中的氧化应激蛋白纳入检测面板，实验中，通过NDUFA10抗体对NADH氧化还原酶辅酶10(NDUFA10)进行了检测[2]。其Western blot流程为，加入一抗(Keap1、Nrf2、NDUFA10、HO-1、Trx、Bcl-2、Cytc、Bax、β-actin和Caspase-3，稀释度均为1︰1000)4℃孵育过夜，PBS洗涤3次，加入辣根过氧化物酶标记的IgG二抗(稀释度为1︰2000)室温孵育1 h[2]。结果以灰度比值给出定量读数，空白组、模型组、八味沉香散中剂量组的NDUFA10分别为0.72±0.07、1.02±0.08、0.74±0.11（与空白组比较a：P＜0.05，与模型组比较b：P＜0.05）[2]。进一步讨论的结论为，氧糖剥夺损伤后，调控氧化应激的相关蛋白(Keap1、Nrf2、NDUFA10、HO-1和Trx)表达升高，而给予八味沉香散含药血清，降低氧化应激相关蛋白(Keap1、Nrf2、NDUFA10、HO-1、Trx)表达[2]。该研究的结论为，八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤有较好的保护作用，其机制与降低细胞氧化损伤、抑制细胞凋亡相关。同时该实验也说明在心肌缺血体外模型中，NDUFA10抗体能够稳定反映复合物Ⅰ亚基的氧化应激响应。
NDUFA10抗体在互作靶点锁定与在体验证中的双溯源使用
在郭平的论文中，在糖尿病心肌病（DCM）模型中证明，膜蛋白CAV3通过与线粒体复合物Ⅰ亚基NDUFA10相互作用、抑制其溶酶体途径降解，从而恢复复合物Ⅰ活性、改善线粒体功能。其机制上，通过质谱分析和免疫共沉淀实验发现CAV3与线粒体复合物I的亚基NDUFA10相互作用，CAV3不影响心肌细胞中NDUFA10的mRNA水平，但抑制NDUFA10发生溶酶体途径的降解，从而恢复线粒体复合物I的活性，改善线粒体功能[3]。该研究使用两支不同溯源的NDUFA10抗体用于免疫印迹与免疫共沉淀的相互佐证。通过NDUFA10抗体进行CO-IP实验，发现NDUFA10蛋白可以结合CAV3[3]，体内外功能挽救实验则显示，敲低NDUFA10可以部分减弱CAV3过表达对于糖尿病心肌病的保护作用[3]。两支不同溯源的NDUFA10抗体在同一机制研究中并行使用，为复杂背景样本中双抗体交叉确认提供了范本。
NDUFA10抗体对吡那地尔后处理“复合体Ⅰ亚基代偿”的蛋白质组学证据
有研究建立Langendorff离体心脏缺血再灌注模型，对心肌线粒体行双向凝胶电泳与质谱鉴定。其研究结果为，Pina组NADH脱氢酶1α亚复合体10亚基(NDUFA10)、NADH脱氢酶铁硫蛋白2(NDUFS2)和NADH脱氢酶黄素蛋白2(NDUFV2)表达低于I/R组[4]。该结论阐释，吡那地尔后处理可能抑制了复合体I的亚基(NDUFA10、NDUFS2和NDUFV2)代偿性增加，但促进了IDHA和ECH1表达并引发了ATP合酶δ亚基发生磷酸化[4]。方法学上，经蛋白质点的检测、背景扣除、量化和匹配后，每张凝胶上检测出(480±22)个蛋白质点，PDQuest 8.0软件分析后得到7个差异蛋白质点[4]。但缺少以NDUFA10抗体对候选差异点做Western blot确证与定量。
参考文献
[1] 邱平明, 张晓, 王爽, 等. 海洛因成瘾和正常大鼠前额叶皮质差异蛋白的分离与鉴定[J]. 南方医科大学学报, 2007, 27(4): 427-431.
[2] 宫佰会, 李凤丽, 万新焕, 等. 八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制研究[J]. 中国药房, 2023, 34(1): 40-46.
[3] 郭平. CAV3通过抑制NDUFA10介导的线粒体功能障碍减轻糖尿病心肌病[D]. 武汉: 华中科技大学, 2024.
[4] 魏义勇, 李科, 刘云, 等. 吡那地尔后处理大鼠缺血再灌注损伤心肌线粒体的蛋白质组学研究[J]. 第三军医大学学报, 2011, 33(21): 2287-2290.