线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)

染料JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential）△Ψm的理想荧光探针。与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别。线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件，发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体膜电位崩溃，细胞凋亡便不可逆转。JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位 Ψm的理想荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在形式，两者发射光谱不同。在正常细胞内，线粒体膜电位较高，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可产生红色荧光；凋亡早期，线粒体膜电位降低，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体，可产生绿色荧光。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可检测到细胞膜电位的下降，可将JC-1荧光颜色的转变作为细胞凋亡早期的检测指标。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。JC-1单体的最大激发波长为514 nm，最大发射波长为529 nm；JC-1聚合物的最大激发波长为585 nm，最大发射波长为590 nm。实际观察时，常规设置红色荧光和绿色荧光即可。

1.收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。细胞数量在2-5X105个。

2.用PBS洗涤细胞两次。离心收集细胞。

3.用500ul JC-1染色工作液将细胞重悬，37℃，5%CO2的培养箱中孵育15-30分钟。

4.在4°C，300-500×g力离心间5分钟，弃培养基，收集细胞。

5.用冷PBS洗涤细胞两次。

6.用500ul PBS将细胞重悬。

7.用流式细胞仪或荧光分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。