小鼠子宫平滑肌细胞

平滑肌细胞又叫平滑肌纤维，系构成平滑肌的纤维状长细胞。由于平滑肌所分布的部位不同，平滑肌细胞的长度很不一致，在小血管壁上的平滑肌细胞长度仅有20μm左右，妊娠期子宫壁平滑肌细胞可长达500μm，位于一般器官平滑肌细胞的长度约200μm左右，此细胞的宽度在7μm以内。小鼠子宫平滑肌细胞分离自子宫组织；小鼠子宫平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。小鼠子宫平滑肌细胞的主要功能：①子宫平滑肌能保持子宫的基本形态，在孕期能最大化的扩张子宫容积，保证胎儿孕育环境；②平滑肌细胞有收缩舒张能力，在生产时能形成生理性的缩腹环，推动胎儿向下移动，辅助生产。将小鼠麻醉处死，迅速取出子宫放于预冷Ｈａｎｋｅ’ｓ液中，冲洗2-3次，以剪刀将周围组织去除干净，将子宫外膜用刀片轻轻刮掉，将子宫纵向剖平铺，内膜面朝上，用镊子固定住一端，从固定处开始用一次性1毫升注射器的针头（打弯成30°角）作为分离器轻轻将子宫内膜和基质部分刮掉，将内膜和基质去除干净的子宫平滑肌条剪碎，用3毫升0.25％的胶原酶和0.25％胰酶混合消化液37℃水浴震荡消化1h，2ml有血清培养液终止消化，吹打数次，200目细胞筛过滤吸取悬液，再通过400目细胞筛，收集滤液1000rpm／10min离心，基础培养液洗２次，去除细胞碎片，接种于35mm培养皿中培养。台盼兰排斥试验查细胞存活率大于90％。用２０％ＦＣＳＤＭＥＭ－Ｆ１２培养液，放入37℃、95５％湿度、5％二氧化碳的培养箱中培养，每隔3天换一次液。体外培养３－４天后形成子宫平滑肌细胞单层，约２周后细胞融合成片。倒置相差显微镜下观察单个平滑肌细胞呈梭形或带状，有多个细胞突起，胞质丰富，胞质密度高，不透明，平行排列成束，部分重叠，表现为典型的“谷”、“峰”状生长。