高灵敏度化学发光液
高灵敏度化学发光液 性质
高灵敏度化学发光液是基于鲁米诺底物的化学发光试剂盒，用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体及其关联的抗原。辣根过氧化物酶在H2O2存在下，氧化化学发光物质鲁米诺（luminol）生成一种能发光的电子激发中间体，当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光，在化学增强剂存在下光强度可以增大1000倍。
高灵敏度化学发光液，ECL化学发光液诞生于1990年，是决定Western Blot是否功败垂成的关键。ECL采用鲁米诺(luminol)底物进行灵敏的检测，并且加入了增强剂，增加了酶活力，从而大幅提高了信号强度和持续时间，适用于现在所有常规的蛋白质印迹实验。
高灵敏度化学发光液与传统产品相比还具有更加明显的优势：
灵敏度更高：可达低pg量级，获得更可靠优秀的结果；
信号稳定性更高：长时间维持足够强度，非常适合大量实验的开展，可以从容地安排实验和检测之间的时间；
信号强度更强：意味着更低的一抗和二抗用量，即降低了背景，又节约了抗体试剂的费用。
ECL试剂的核心原理为氧化反应发光：鲁米诺（lumino）作为发光底物的主要成分，在碱性条件下，通过辣根过氧化酶（HRP）催化，被H2O2氧化生成3-氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子，最大发射波长为425 nm，光子信号可通过X射线胶片或CCD成像仪被捕获。
高灵敏度化学发光液检测原理是蛋白质在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白。洗膜后用ECL化学发光液室温孵育膜数分钟，目的蛋白就可在X光胶片或者其他荧光成像设备获得清晰条带。