UMNSAH/DF-1 鸡胚胎成纤维细胞系

UMNSAH/DF-1是一种自发永生化的鸡细胞系。将原代鸡胚成纤维细胞分离培养;成纤维细胞被传代直到它们开始衰老;细胞衰老期间进行浓缩，保持约30% ~约60%的培养合度。这些细胞可作为病毒繁殖、重组蛋白表达和重组病毒生产的底物。UMNSAH/DF-1是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细胞株，自发永生化。 分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养；传代直到衰老；在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满；不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。 在软琼脂上没有观察到克隆增殖，说明这些细胞是永生化而没有转化。 这株细胞可作为病毒增殖、重组蛋白表达和重组病毒生产的基质。

细胞在本库通过支原体检测阴性（可供检测报告）。
细菌检测结果：阴性；真菌检测结果：阴性UMNSAH/DF-1细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡成纤维细胞株，自发永生化。分离的原代鸡胚成纤维细胞在培养液中培养，在培养过程中保持细胞在30%到60%密度，传代直到衰老，不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观察到克隆增殖，说明UMNSAH/DF-1细胞是永生化而没有转化。UMNSAH/DF-1细胞可作为病毒增殖、重组蛋白表达和重组病毒生产的基质。1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

1）准备DMEM（NaHCO3 1.5g/L）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%；细胞冻存后复苏存活率只有50%左右，建议加大冻存密度。

2）UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞系培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：39℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞系冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

鸡胚胎，自发永生化贴壁生长（Adherent）10天（10FD）成纤维细胞样， 贴壁生长复苏UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。自发永生化细胞

UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于39℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。