DiI 是一种长链碳菁染料。碳菁染料广泛用作亲脂性示踪剂，用于标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。
| 中文名称 |
DiD perchlorate|细胞膜红色荧光探针
| 中文别名 |
1,1´-双十八烷基-3,3,3´,3´-四甲基吲哚菁高氯酸盐;1,1''-双十八烷基-3,3,3'',3''-四甲基吲哚菁高氯酸盐;1,1 -双十八烷基-3,3,3 ,3 -四甲基吲哚菁高氯酸盐;1,1`-双十八烷基-3,3,3`,3`-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐;1,1′-双十八烷基-3,3,3′,3′-四甲基吲哚菁高氯酸盐;1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚菁高氯酸盐;1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚菁高氯酸盐(DiI);1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐;DiI(细胞膜红色荧光探针);N,N-二甲基甲酰胺;细胞膜橙红色荧光探针
| 英文别名 |
3H-Indolium,2-[3-(1,3-dihydro-3,3- dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)- 1-propenyl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-,perchlorate;1,1'-Di-n-octadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate;1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate;1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate(DiI);3H-Indolium,2-[3-(1,3-dihydro-3,3- dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)- 1-propenyl]-3,3-d...;3H-Indolium,2-[3-(1,3-dihydro-3,3- dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)- 1-propenyl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-,perchlorat;DiI( DiIC18(3));DiIC18(3);1,1'-DIOCTADECYL-3,3,3',3'-TETRAMETHYLINDOCARBOCYANINE PERCHLORATE;DiIC18(3) [1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate]? *Crystallin;DIIC18(3));DiI;DiIC18(3) [1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate] *Crystalline*
| 产品详情 |
DiI 即 DiIC18(3)，全称为 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。DiI 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiI 在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI 被激发后可以发出橙红色的荧光，DiI 和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。其中，最大激发波长为 549nm，最大发射波长为 565nm。
长链二烷基碳菁类染料，特别是 Dil，被广泛应用于细胞及组织的染色，进行顺行或逆行的神经元示踪分析。Dil 不会影响细胞的活力，生长以及基本的生理特性。用 Dil 标记的运动神经元，在培养基条件下持续跟踪时间可长达四周，在体内长达一年。在经过固定处理的样品中，染料在质膜中以 0.2~0.6mm/天的速度缓慢横向扩散均匀标记神经元；在活体组织中扩散速度可达到 6mm/天。经过醛类试剂固定的组织，Dil 的扩散可持续两年。一般情况下，除非细胞膜（例如切片部位）被破坏，未标记的染料不会向非标记的细胞转移。
| 生物活性 |
Dil is a fluorescent neuronal tracer that labels cell bodies, axons, dendrites, and dendritic spines.1 It has been used as an anterograde tracer to study neuronal development in vivo and as a retrograde tracer to label hippocampal neuronal connections in fixed postmortem brain tissue.1,2 Dil has also been used as a long-term plasma membrane label in live cells.2 It displays excitation/emission maxima of 549/565 nm, respectively.3
| 体外研究(In Vitro) |
羰花青染料广泛用作 Di 来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。长链羰花青包括 DiO (DiOC18 (3))、DiI (DiIC18 (3))、DiD (DiIC18 (5)) 和 DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料 DiA (4-Di-16-ASP) 用于标记膜和其他疏水结构。DiIC16 (3) 具有比 DiI (C18) 更短的烷基取代基 (C16)。它们在脂质环境中具有极高的消光系数、环境依赖性荧光和短的激发态寿命。它们在室温下是油状物，在水中发出微弱荧光，但当掺入膜中或与亲脂性生物分子结合时，它们发出高荧光且相当耐光。这些光学特性使它们成为细胞质膜染色的理想选择。一旦应用于细胞，这些染料就会在质膜内横向扩散，导致整个细胞染色[1]
DiO、DiI、DiD 和 DiR 呈现出不同的绿色、橙色、红色和红外荧光，从而促进活细胞的多色成像和流式细胞术分析。DiO 和 DiI 可分别与标准 FITC 和 TRITC 过滤器一起使用。其中 DiI 及其类似物是最常用的，因为它们通常表现出非常低的细胞毒性。此外，DiI 广泛用于测定 LDL 和 HDL 等脂蛋白。亲脂性氨基苯乙烯基染料 DiA 也常用于神经元示踪[2]。
参考实验方案
1. 制备 Di 染色液
一个。制备 DMF、DMSO 或乙醇储备溶液：储备溶液应在二甲基甲酰胺 (DMF)、二甲基亚砜 (DMSO 或乙醇 DMSO 中配制，浓度为 1-5 mM。作为 Di 的溶剂，DMF 优于乙醇。储备溶液应任何未使用的溶液需要等分并重新冷冻至少 -20℃。避免反复冷冻/解冻循环。溶液可储存 6 个月。
b. 准备工作溶液：将储备溶液稀释到合适的缓冲液如无血清培养基、HBSS 或 PBS 配制成 1 至 5 μM 的工作液。我们不建议将水溶液存放超过一天。
注意：工作液的最终浓度
2. 悬浮细胞
a. 1000g 4℃离心3-5分钟，弃上清，PBS洗2次，每次5分钟。细胞密度为1×106/mL。
b. 加入1 mL Di工作液，室温孵育5-30分钟。
C. 4℃，400g离心3-4分钟，弃上清。
d．用PBS洗涤2次，每次5分钟。
e．用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.贴壁细胞
a．在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
b.从培养基上取下盖玻片并吸出多余的培养基。
c.加入100 μL工作液，轻摇使之完全覆盖细胞，室温孵育5-30分钟。
d．用培养基洗两次，每次5分钟。通过荧光显微镜或流式细胞仪观察。
| 体内研究(In Vivo) |
DiI 标记的运动神经元在培养中可存活长达 4 周，在体内可存活长达一年[1]。
| 描述&特点 |
羰花青染料广泛用作 Di 来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。长链羰花青包括 DiO (DiOC18 (3))、DiI (DiIC18 (3))、DiD (DiIC18 (5)) 和 DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料 DiA (4-Di-16-ASP) 用于标记膜和其他疏水结构。DiIC16 (3) 具有比 DiI (C18) 更短的烷基取代基 (C16)。它们在脂质环境中具有极高的消光系数、环境依赖性荧光和短的激发态寿命。它们在室温下是油状物，在水中发出微弱荧光，但当掺入膜中或与亲脂性生物分子结合时，它们发出高荧光且相当耐光。这些光学特性使它们成为细胞质膜染色的理想选择。一旦应用于细胞，这些染料就会在质膜内横向扩散，导致整个细胞染色[1]。 DiO、DiI、DiD 和 DiR 呈现出不同的绿色、橙色、红色和红外荧光，从而促进活细胞的多色成像和流式细胞术分析。DiO 和 DiI 可分别与标准 FITC 和 TRITC 过滤器一起使用。其中 DiI 及其类似物是最常用的，因为它们通常表现出非常低的细胞毒性。此外，DiI 广泛用于测定 LDL 和 HDL 等脂蛋白。亲脂性氨基苯乙烯基染料 DiA 也常用于神经元示踪[2]。
| 参考文献 |
[1]. Gan WB, et al. Multicolor "DiOlistic" labeling of the nervous system using lipophilic dye combinations. Neuron. 2000 Aug;27(2):219-25.
[2]. D P Kuffler, et al. Long-term survival and sprouting in culture by motoneurons isolated from the spinal cord of adult frogs. J Comp Neurol. 1990 Dec 22;302(4):729-38.
[3]. D P Kuffler, et al. Long-term survival and sprouting in culture by motoneurons isolated from the spinal cord of adult frogs. J Comp Neurol. 1990 Dec 22;302(4):729-38.