优惠券使用说明>

暂无可领优惠券

上海源叶生物科技有限公司

主营产品:标准品,生化试剂,透析袋,标准物质

客服热线:021-61312847; 18021002903

产品目录更多
  • 电话:021-61312847; 18021002903
  • 传真: 3008007432
  • 邮箱:3008007432@qq.com
  • 网址:http://www.shyuanye.com
  • 国籍:中国
  • 地址:长塔路465号6幢
  • 点击这里给我发消息
  • 企业认证:
  • 企业体检:
  • CB指数:60
细胞培养过程中的支原体污染的来源与控制方法
发布日期:2020/10/29 14:52:38发布人:上海源叶生物科技有限公司

Mycoplasma国内主要有三种译名,医学文献译为“支原体”(分枝原体,枝原体,类菌质体),动物医学文献译为“霉形体”或“支原体”,台湾、香港则译为微浆菌。

支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。自然界分布广泛,种类多,有80余种,分为两个属:一为支原体属(Mycoplasma),有几十个种;另一为脲原体属(Ureaplasma),仅有一种。与人类感染有关的主要是肺炎支原体和解脲脲原体。

支原体无细胞壁,多呈不规则球状、长丝状,可分枝,营寄生共生或腐生。一般侵害对象为动植物,可造成多种疾病。

细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明,95%以上是以下四种支原体:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和菜氏无胆甾原体(A.laidlawii),为牛源性。国外调查证明,大约有二十多种支原体能污染细胞,有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。

支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(某些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染,等等。
体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力,因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染(如细菌、真菌、支原体、病毒等)、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染(如抗体、补体)。对于天然培养基,污染主要来源于取材过程及生物材料本身,应当严格选材,严格操作。对于合成培养基,污染主要来源于配制过程,配制所用的水,器皿应十分洁净,配制后应严格过滤除菌。

由于体外培养细胞自身没有抵抗污染的能力,而且培养基中的抗生素抗污染能力有限,因而培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回。支原体污染后,因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,细胞无明显变化,外观上给人以正常感觉,实则细胞受到多方面潜在影响,如引起细胞变形,影响DNA合成,抑制细胞生长等。

组织细胞培养工作中,可以从以下几方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基冲加入适量的抗生素。

抗生素主要用于消毒培养液,是培养过程中预防微生物污染的重要手段,也是微生物污染不严重时的“急救”方法。不同抗生素杀灭微生物不同,应根据需要选择。

在细胞培养过程中如果发现破碎的细胞甚多,培养细胞需要频繁改善营养环境才能支持长期传代培养时,应该怀疑支原体污染。支原体污染难以观察特殊的外观变化,培养液也不浑浊。

从2013年开始,《Nature》期刊已正式要求涉及细胞培养的投稿文章,要求必须进行支原体检测,截止目前,大量的SCI期刊都跟进这项要求。为了提高动物细胞培养生物制品的质量和安全性,中华人民共和国药典规定主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞应进行支原体检测。美国食品药品监督管理局(FDA)规定,应该用合适的方法检测细胞的支原体污染状况。欧洲药典规定对细胞治疗产品需要进行严格的支原体检测。以上这些要求和规定,再加上支原体的特性和污染的后果都指向一点——支原体分子检测成为细胞培养必不可少的环节。先达基因研发了一种细胞污染支原体检测试剂盒,每次检测只需半个小时,减少了很多工作量其原理是基于公司自主开发的实时荧光恒温核酸检测技术(ERA),可以在恒定的低温下(25℃-42℃)对痕量的支原体种内保守性DNA片段进行特异性的扩增,扩增反应可以在20min内完成,该试剂盒检测范围涵盖130种支原体。

支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体,常用方法有:抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。要注意的是:支原体没有细胞壁,故作用于细胞壁生物合成的抗生素,如内酰胺类、万古霉素等是不敏感的;对多粘菌素、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等,氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小的抑制作用。必要时更换所有培养用物。通常,滤过除菌的方法对支原体是没有作用的。

由于一些微生物,如支原体,病毒等能通过滤膜,所以过滤药品仍潜在被外源微生物污染的危险,近年来,6Co辐射灭菌技术在医药、食品等领域广泛应用,由于辐射灭菌能够彻底杀灭所有微生物。有试验证实以2Mrad辐射处理的各培养基样品达到了无菌要求,经多批培养试验,辐射灭菌安全可靠;辐射灭菌的培养基营养性能不低于过滤组,证明辐射灭菌对培养基性能无不良影响;对血清的辐射灭菌试验效果也表明60COγ射线不影响培养效果。把干粉培养基经无菌操做定量分装于灭菌容器内,辐射后以干粉原型贮藏,不但培养基的纯净性得到保障,而且营养性能较过滤后以水溶液形式保存更稳定,对谷氨酰胺等这类水溶液不稳定者特别合适。


相关新闻资讯
  • 2023/12/02
    定义:荧光探针就是以荧光物质作为指示剂,并在一定波长光的激发下使指示剂产生荧光,通过检测所产生的荧光实现对被检测物质的定性或者定量分析。 荧光探针分子通常由三部分组成: 识别基团(receptor) 荧光基团(fluorophore) 连接体部分(spacer) 识别基团也称受体决定了探针分子的选择性和特异性,荧光基团则决定了识别的灵敏度,而连接体部分
  • 2023/07/17
    2023癸卯年的闰二月 让这个春天特别长 不似往年这般转身间便离去了 走在和煦的春风中 感受着春的气息 鲜花在暖风中一一绽放 绵绵夏日总感觉似近似远 即将来临却又远去 回报春的暖意,雨的滋润 源叶在这个如画的春天 推出买五赠一活动回馈顾客 活动内容
  • 2023/06/25
    单糖是构成各种糖分子的基本单位,天然存在的单糖一般都是D型,由3~7个碳原子与氢及氧原子结合的多羟基醛或酮。最简单的单糖是含3个碳原子的丙糖。随碳原子数目增加有丁糖、戊糖及己糖等。最常见的单糖是葡萄糖,可以在血液中发现,化学方程式是C6(H2O)6。 在自然界中绝大多数的糖是D构型的。自然形成的单糖有约有20种类型。此外,还有大约50种人造单糖。其中最知名的是葡萄糖,果糖和半乳糖。 单

查看更多

商家暂时不对外公布

主页 | 企业会员服务 | 广告业务 | 联系我们 | 旧版入口 | 中文MSDS | CAS Index | 常用化学品CAS列表 | 化工产品目录 | 新产品列表 | 评选活动| HS海关编码
Copyright © 2008 ChemicalBook 京ICP备07040585号  京公网安备 11010802032676号  All rights reserved.
热线电话:400-158-6606