禽流感病毒H5亚型ELISA抗体检测试剂盒说明书
【兽用名称】
通 用 名 禽流感病毒H5亚型ELISA抗体检测试剂盒
商 品 名 无
英 文 名 ELISA Kit For H5 Subtype Avian Influenza Virus Antibodies
汉语拼音 Qinliuganbingdu H5yaxing ELISA Kangtijiance Shijihe
【主要组分与含量】
【作用与用途】 用于禽流感病毒H5亚型抗体的检测。
【注意事项】
（1）实验前，将试剂盒取出置25℃±3回温，至少30分钟，实验完成后置2～8℃保存。
（2）若试剂盒阴阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物，属正常现象。
（3）请在试剂盒规定的有效期内使用；禁止非同批试剂盒混用。
（4）没有用完的抗原包被板应贮存在密封塑料袋内，置2～8℃存放。
（5）避免底物液暴露于强光，避免接触氧化剂。
（6）浓缩洗涤液用蒸馏水或纯水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
（7）严格按照操作程序，仔细的吸液、计时，充分洗涤，对于获得精确的结果是非常必要的。
（8）使用样品稀释板将所有待检血清稀释好，再进行检测。
【用法与判定】
1 用法
1.1 样品准备 取动物全血，4000r/min离心10分钟，收集上清。或采集血液，待凝固后自然析出血清。血清清亮，无溶血。
1.2 样品稀释 将待检血清样品在样品稀释板中按1:500的比例稀释（例如：在样品稀释板中先加入196μl样品稀释液，加4μl待检血清，在抗原包被板中再加入90μl样品稀释液，再取上述稀释好的血清样品10μl）。不同的样品要注意换吸头。样品在稀释过程中要充分混匀。阴性、阳性对照不稀释，直接使用。
1.3 洗涤液配制 20倍浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（20~25℃），然后用蒸馏水或纯水作10倍稀释，混匀（例如：10ml的浓缩洗涤液加上90ml纯水）。
1.4 操作步骤
1.4.1 取抗原包被板（根据样本多少，可拆开分次使用），每孔加入稀释好的样本100μl；另外设阳性对照、阴性对照各2孔，100μl/孔。置37℃孵育30分钟。
1.4.2 弃去板中液体，每孔加入稀释好的洗涤液300µl，不必静置，弃掉孔中洗涤液，重复洗涤共计洗板5次，最后一次拍干。
1.4.3 每孔加入100μl酶结合物，轻微振荡混匀。置37℃下孵育30分钟。
1.4.4 弃去板中液体，洗涤5次，方法同1.4.2。
1.4.5 每孔加底物显色液100µl，室温（20~25℃）避光显色10分钟。
1.4.6 每孔加终止液50µl。10分钟内用酶标仪测定并记录各孔在450nm波长处的吸光度（OD）值（测定前轻轻振匀，勿溢出）。
2 判定
2.1 成立条件 在酶标仪上测各孔的OD450nm值。试验成立的条件是：阴性对照孔平均OD450nm值应＜0.5，阳性对照孔平均OD450nm值应＞0.5。
2.2 判定标准
S为样品孔OD450nm值，P为阳性对照孔平均OD450nm值，计算样品S/P值。
若S/P值≥0.5时判为阳性；若S/P值＜0.5时判为阴性。
【规格】 48孔/盒或96 孔/盒或192 孔/盒
【贮藏与有效期】 2~8℃保存，有效期为12个月。
仅供科研使用