中文名称：5'-荧光素氨基磷酸酯
英文名称：5'-Fluorescein Phosphoramidite
一、定义
5'-荧光素氨基磷酸酯是一种专为核酸（DNA/RNA）5'端标记设计的荧光修饰试剂，其核心结构由三部分组成：
荧光素发色团：基于异硫氰酸荧光素（FITC）的衍生物，发射明亮的黄绿色荧光（Ex/Em≈495nm/520nm）。
氨基磷酸酯保护基：含二异丙基氨基（iPr₂N）和氰基乙基（CE）保护基团，确保合成过程中化学稳定性。
磷酸三酯连接臂：通过磷酸酯键与核酸5'端羟基（-OH）共价结合，形成稳定的标记复合物。
二、荧光特性与理化性质
荧光颜色：黄绿色荧光，与DAPI（蓝色）、Cy3（橙红色）形成互补，适用于多色荧光共定位实验。
溶解性：易溶于无水乙腈（ACN）、二氯甲烷（DCM）等有机溶剂，需避光保存于-20℃以防止光降解。
稳定性：在pH 5-9范围内稳定，量子产率达0.92，光稳定性优于传统荧光素（半衰期延长3倍）。
三、核心应用领域
核酸合成与标记：
寡核苷酸探针：标记引物或探针，用于实时荧光定量PCR（qPCR）、SNP分型及突变检测。
基因芯片：制备荧光标记的DNA微阵列，实现高通量基因表达谱分析。
RNA标记：标记mRNA或siRNA的5'端，研究RNA定位、降解及翻译效率。
细胞成像与追踪：
标记反义寡核苷酸（ASO），通过荧光显微镜观察其在细胞内的分布及核质转运。
结合荧光原位杂交（FISH），定位染色体特定基因区域。
四、应用优势
高效标记：通过自动化核酸合成仪直接引入，标记效率>95%。
低背景干扰：荧光素光谱与常见染料（如TRITC）分离度高，减少串色风险。
成本可控：国内企业（如上海生工、百奥迈科）已实现规模化生产，价格较进口产品降低30%。